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目的：体内肿瘤生长依赖于促血管生成因子(angiogenic factors)诱导的血管生成(angiogenesis)。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是近年来发现的最强烈的内皮细胞分裂刺激素和血管生成诱导剂。VEGF在骨肉瘤血管生成发展中起着重要作用。本实验通过建立裸小鼠移植瘤模型，应用腺病毒介导VEGF-siRNA对人骨肉瘤抑制作用的体内研究，探讨封闭内源性VEGF的产生对骨肉瘤血管生成的影响，为进一步开展针对VEGF的肿瘤抗血管生成基因治疗积累资料。方法：应用鼠龄4-8wk，体重15～20g的Balb／c裸小鼠，雌雄兼半，于裸小鼠左侧季肋部皮下注射VEGF高表达的人骨肉瘤细胞系MG63，300万／只，建立裸小鼠皮下移植瘤模型。实验动物随机分为3组，A组：AD-VEGF-siRNA组，15只；B组：AD-EGFP组，15只；C组：PBS组，15只。接种肿瘤细胞后第8，10，12，14，16天肿瘤内用微量注射器多点注射各实验组药物，200ul／次，病毒总量2×10~6pfu。对裸小鼠皮下移植瘤模型治疗组和对照组进行为期19天的实验观察，在第一次注射药物后隔天测量1次裸小鼠肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线。接种后第18天各组随机抽取2只裸小鼠行MRI检查观察骨肉瘤瘤体血流灌注情况。所剩6只裸小鼠在接种后第19天处死，取肿瘤标本，称重。各组取随机抽取1例标本的少量组织，经6％戊二醛磷酸缓冲液固定，再处理后，行透射电镜下仿血管发生超微结构观察。余下标本(包括已取出少量组织的标本)于10％福尔马林溶液中固定，常规石蜡包埋后行连续切片，行大体标本观察，常规HE染色，VEGF，CD31相关抗原免疫组化染色。结果：1．实验动物肿瘤大体形态，HE病理观察：3组实验动物约在接种后5天成瘤。AD-VEGF-siRNA治疗组皮下肿瘤瘤体较小，多呈半球形，部分小鼠有出血，溃疡灶。细胞数目较少，间隙大，肿瘤内毛细血管减少。AD-EGFP组和PBS组移植瘤瘤体较大，呈分叶状。细胞数目多，细胞排列紧密，间质稀少，肿瘤内毛细血管丰富。2．实验动物生长过程中瘤体体积，瘤重观察：AD-VEGF-siRNA治疗组动物从给药开始，肿瘤缓慢生长直到给药结束，第18天肿瘤瘤体体积为(0.3132±0.1793)cm~3，同期两对照组AD-EGFP组和PBS组分别为(1.2130±0.2904)cm~3和(1.4303±0.9475)cm~3，第19天肿瘤瘤重AD-VEGF-siRNA治疗组为(0.7473±0.2071)g，AD-EGFP组和PBS组分别为(1.1899±0.2741)g和(1.1861±0.3496)g。方差分析各组间体积，瘤重差异均具有显著性(P＜0.05)。3．各组CD31标记的微血管密度(MVD)计数：AD-VEGF-siRNA，AD-EGFP和PBS组阳性血管计数分别为5.79±0.34，10.59±1.06，10.98±0.45，方差分析各组间差别具有显著性(P＜0.05)。4．各组间VEGF表达情况：AD-VEGF-siRNA组阳性统计数为235228.09±123244.41，AD-EGFP组为964192.40±90479.62，PBS组为981298.00±213590.50。方差分析各组间差别具有显著性(P＜0.05)。5．肿瘤组织MVD和VEGF表达相关性分析：相关系数r为0.9989，p=0.0302，呈正相关。6．MRI观察骨肉瘤瘤体血流灌注情况：病毒组AD-VEGF-siRNA组下降幅值及最大斜率有小于PBS组的趋势，说明其局部灌注有小于PBS的趋势。7．仿血管发生的观察：AD-VEGF-siRNA组血管拟态计数分别为1.4000±0.5477，2.6000±0.5477，2.6000±0.8944，方差分析差异有显著性(P＜0.05)，两对照组间没有明显差异(P＞0.05)。8．透射电镜观察：骨肉瘤组织中可见由肿瘤细胞围成的管道样结构结论：1．AD-VEGF-siRNA对骨肉瘤生长在宏观和微观上起到了明显的抑制作2．免疫组化分析表明：AD-VEGF-siRNA抑制肿瘤细胞VEGF的表达，从而干扰肿瘤新生血管的生成。3．骨肉瘤中VEGF与微血管密度(MVD)成明显正相关。3．MRI灌注成像显示AD-VEGF-siRNA可以减少肿瘤内血流灌注，表明动态增强MRI在抗肿瘤血管生成形态学研究中的应用价值。4．动物实验的角度也证实骨肉瘤内存在仿血管发生现象，AD-VEGF-siRNA可能通过抑制肿瘤血供进而干扰仿血管发生。