J亚群禽白血病病毒gp85重组干酪乳杆菌表达及其免疫效果的研究

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J亚群禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus subgroup J, ALV-J)是1988年首次在肉用型鸡中分离得到,主要引发鸡的髓细胞组织增生和肾瘤。该病已经迅速蔓延到许多国家,给世界养禽业造成巨大的损失。目前还没有商品化的疫苗用于防治ALV-J感染,国外主要通过净化种鸡群的办法来防控ALV-J。但是由于养殖的大环境已经污染,所以只依靠净化来完全控制ALV-J感染是不可能的。最近几年,许多专家学者也都尝试研制ALV-J灭活苗和弱毒苗,但是由于灭活病毒的同时也破坏了其诱导产生抗体的能力,而且该病毒的抗原结构复杂,要想得到理想的弱毒苗十分困难。因此,研制新型有效的ALV-J疫苗势在必行。由于大多数病毒和细菌都是通过黏膜侵入动物机体,所以利用活载体呈递抗原到黏膜组织,从而诱导黏膜免疫应答来抵抗大量的细菌病毒的入侵的这种途径是十分有效的。近年来乳酸菌口服疫苗已成为研制的热点,利用乳酸菌作为表达外源保护性抗原基因的活载体菌株,能将乳酸菌的生物学功能和外源抗原基因的免疫原性相结合,同时乳酸菌作为正常生理性细菌,又符合新型疫苗的安全、方便、廉价等特点。本研究的目的是探究原核表达J亚群禽白血病病毒gp85囊膜蛋白诱导雏鸡产生保护性抗体及抗ALV-J感染的作用。本研究利用PCR技术从J亚群禽白血病病毒env基因中扩增出gp85囊膜糖蛋白基因;将其克隆至大肠-乳酸杆菌穿梭表达载体pMG36e中,转入干酪乳酸杆菌,并使其表达。利用Western-blot、流式细胞技术和间接免疫荧光检测蛋白的表达含量和活性,并将含重组质粒的干酪乳酸菌口服或滴鼻免疫SPF鸡,免疫接种后检测不同时间段抗体水平;同时在免疫7周后,对试验鸡进行攻毒保护性试验。结果表明,重组干酪乳杆菌pMG36e-gp85/L.casei免疫雏鸡后能够产生明显的抗体水平;对照组病毒血症平均检出率为86%,而口服组和滴鼻组病毒血症平均检出率为40%和55.2%;由此可见,构建的重组干酪乳杆菌pMG36e-gp85/L.casei对禽白血病病毒具有一定的抵抗力。本研究的完成,首次利用干酪乳酸杆菌表达载体对禽白血病病毒囊膜蛋白gp85基因进行表达,为J亚群禽白血病重组乳酸菌口服疫苗的研制提供可靠的科学依据,同时也为其他囊膜病毒禽病的防治提供新的方法和思路。
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