论文部分内容阅读
该文对这1573bp的序列进行了缺失分析,发现了控制基因在果实组织中特异性表达的主要功能区域.同时,构建了一套由果实特异性启动子诱导的甜蛋白Brazzein基因的植物表达载体.1.根据已克隆的wml1 5端1573bp启动子区序列内部的酶切位点,采用限制性酶切的方法,获得该启动于序列的一系列缺失突变,长度分别为1197bp、896bp、795bp,经过中间载体pBluescriopt SK(-)获得合适的酶切位点后,3个DNA片段分别代替植物表达载体pBI426的组成型启动子CaMV35S,构建成报告基因GUS的瞬间表达载体.2.1573bp、1197bp、896bp、795bp四个不同长度的wml1 5端启动子区序列代替植物表达载体pBI121的组成型启动子CaMV 35S,构建成报告基因GUS的植物遗传转化载体,以NPTII为筛选标记基因.3.通过农杆菌介导的遗传转化方法,将4个不同长度的wml1 5端启动子序列诱导的GUS基因的植物遗传转化载体对番茄子叶外植进行遗传转化,获得再生植株.通过PCR特异扩增、Southern杂交鉴定,证明4个启动子片段诱导的GUS基因已经整合到番茄基因组中.4.将1573bp、1197bp、896bp 、795bp 4个不同长度的wml1 5 端启动子片段诱导的GUS基因的瞬间表达载体质粒对西瓜叶、茎、花和不同发育期的果实(授粉后5d、10d、20d)进行基因枪轰击.5.以"京欣一号"西瓜子叶为外植体,通过与含有双向载体pBI121的农杆菌GV3101共培养转化,建立了优化的遗传转化体系.6.1573bp、1197bp、896bp 3个已被证明有果实特异性调控功能的启动子片段与甜蛋白Brazzein基因融合,构建成适合于农杆菌介导的植物遗传转化载体.