论文部分内容阅读
在RPMI-1640、DMEM、M-199、HL四种培养基中分别添加不同比例的新生牛血清、葡萄糖和NaHCO3进行牛温氏附红细胞体的体外培养效果的比较，以确定最佳培养基和新生牛血清、葡萄糖、NaHCO3的添加比例，并依照确定的培养条件进行温氏附红细胞体体外传代培养和温氏附红细胞体体外感染人、兔、山羊和猪红细胞的试验研究；利用体外培养确定的条件，进行了咪唑苯脲、磷酸伯氨喹、盐酸土霉素、四环素等15种药物的体外药物杀灭试验，经综合评价从中选择2种体外杀灭效果最好的药物，进行牛温氏附红细胞体病治疗试验，通过治疗前后临床常规检查、血液涂片镜检、血液生理生化指标测定结果的综合比较，确定治疗牛温氏附红细胞体病的首选药物。研究结果表明：RPMI-1640培养液中添加30％新生牛血清、2.0％葡萄糖、0.20％NaHCO3或在HL培养液中添加20％新生牛血清和1％HEPES，在37℃、57／CO2的条件下进行培养，每12h更换一次培养液，作原代体外培养，二者均能够取得较高的感染率，且红细胞表面附红细胞体数量也较多，统计学无显著差异，但因HL培养基和HEPES价格较高，考虑成本等因素，所以首选RPMI-1640作为培养液。奶牛温氏附红细胞体体外传代培养，当红细胞感染率达80％以上时则收集该孔内红细胞，留约2μl红细胞泥，并补充18μl正常牛红细胞和完全培养液至200μl混匀，使其红细胞感染率保持在7％～9％左右，按原代培养条件进行体外传代培养，可连续传代20代。人、兔、山羊和猪红细胞在体外培养试验中均能被温氏附红细胞体所感染，说明奶牛温氏附红细胞体没有严格的特定宿主，并且兔红细胞对牛温氏附红细胞体有更高的易感性。通过温氏附红细胞体体外药物杀灭试验证明，咪唑苯脲、磷酸伯氨喹体外杀灭效果最好，且在有效浓度范围内对红细胞的影响较轻微；敌百虫、依沙吖啶杀灭效果也很好，但是对红细胞的损伤较咪唑苯脲和磷酸伯氨喹重，因此治疗奶牛温氏附红细胞体应首选咪唑苯脲或磷酸伯氨喹，其次为敌百虫和依沙吖啶。在奶牛温氏附红细胞体病的治疗试验中，通过对治疗前后临床症状观察、血液涂片镜检、奶牛血液的生理生化指标测定，结果表明磷酸伯氨喹治疗效果较咪唑苯脲好，且对机体的毒副作用低于咪唑苯脲，可首选磷酸伯氨喹治疗牛附红细胞体病。