研究背景:本团队创立了一种新的细胞外囊泡分离富集方法即液压透析法,本研究主要在蛋白质组学方面对该方法与超高速离心法进行比较分析,随后研究MASP2蛋白在肾小球疾病患者尿液细胞外囊泡中的表达情况。方法:以健康人的晨尿为对象,利用液压透析法和超高速离心法提取尿液细胞外囊泡后,透射电镜和纳米示踪技术观察其形态和粒径分布情况,采用串联质量标签标记技术（TMT）结合质谱技术对样本蛋白质组学进行分析和比较。以不同肾小球疾病组患者和健康人晨尿为对象,超高速离心法分离细胞外囊泡后,透射电镜、纳米示踪技术评估分离样本纯度。随后免疫印迹方法对常见内参蛋白和细胞外囊泡标记蛋白的表达水平进行分析。最后对MASP2蛋白在各种肾小球疾病患者中尿液细胞外囊泡中的表达水平进行研究。结果:（1）透射电镜和纳米示踪分析技术结果表明,两种方法均可有效提取到0-400nm范围内的典型杯状结构的细胞外囊泡。（2）质谱分析鉴定出2564个蛋白,两种方法共有蛋白所占比例＞85%。提取到的蛋白质与现有数据库中的蛋白谱高度相似。对于常见外泌体标记蛋白,液压透析法提取到的丰度要高于超高速离心法（P＜0.01）。泌尿系统常见的分泌型蛋白丰度两种方法则无明显差异（P＞0.05）。质谱定量分析结果表明,87个蛋白质在液压透析法提取蛋白样品中表达上调（P＜0.01）,117个蛋白质在超高速离心法提取蛋白样品表达上调（P＜0.01）。两种方法提取样品上调蛋白细胞组分分布情况和生物学参与过程相似,但是在超高速离心法中,信号转导、细胞交流、免疫反应占据主要的地位。（3）相比于常见的内参蛋白,TSG101在样品中表达更为稳定。针对常见的细胞外囊泡标记蛋白进行丰度分析,TSG101表达水平同样更为稳定。（4）TSG101蛋白均在样品中稳定表达,而只有在肾小球疾病组中MASP2才呈阳性表达。另外我们还发现在糖尿病肾病不同蛋白尿期组别中,大量蛋白尿期病人MASP2水平显著升高。结论:（1）液压透析法是一种简单易行、可作为针对尿液细胞外囊泡蛋白质进行高通量分析的可靠提取方法。（2）尿液细胞外囊泡MASP2蛋白与肾小球疾病有关,可能有助于早期诊断和评估肾小球疾病肾损伤严重程度。