论文部分内容阅读
目的:本实验通过构建肠道感染白色念珠菌脾虚小鼠模型,应用中药灰树花多糖成分低、中、高三个药液浓度进行干预,观察各组小鼠体质量及一般状态、胸腺指数与脾指数、小肠黏膜组织形态、TLR4-My D88信号通路相关分子表达水平以及IL-6、MCP-1含量的变化情况,探讨灰树花多糖对肠道感染白色念珠菌脾虚小鼠的干预作用以及相关机制,为临床防治白色念珠菌感染提供可靠的实验依据。材料与方法:将120只昆明种SPF级健康小鼠随机分为6组,即正常对照组（A组）、脾虚模型组（B组）、脾虚+白色念珠菌感染组（简称脾虚感染组,C组）、灰树花多糖低剂量治疗组（简称灰树花低剂量组,D组）,灰树花多糖中剂量治疗组（简称灰树花中剂量组,E组）、灰树花多糖高剂量治疗组（简称灰树花高剂量组,F组）。预养一周后,除A组外,其余五组采取疲劳过度法+饮食失节法制备脾虚证模型,连续造模14天。实验第15天（造模成功后）,C、D、E、F组小鼠灌胃白色念珠菌悬液（2×10~8CFU/m L,0.2m L/10g体质量）,A、B组小鼠灌胃等量无菌生理盐水。实验第16天（灌胃菌液后次日）,D、E、F组小鼠分别灌胃灰树花多糖低、中、高浓度药液（5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg）,0.2m L/10g体质量,持续灌胃7天,其他各组灌胃等量无菌生理盐水。在造模和药物干预期间内记录小鼠的体质量和一般状态。实验第22天处死小鼠,完整摘取各组小鼠胸腺及脾脏并测定其重量;摘取各组小鼠小肠组织约1cm,进行HE染色,在光镜下观察小肠黏膜形态改变;采用RT-q PCR法测定各组小鼠小肠组织中TLR4、My D88、NF-κB m RNA的表达水平;采用ELISA法检测各组小鼠肠组织中IL-6、MCP-1含量。结果:1.灰树花多糖对肠道感染白色念珠菌脾虚小鼠体质量和一般状态的影响实验第1天,各组小鼠体质量无明显差异,活动情况良好。实验第14天（造模结束）,除未进行干预的A组外,其他各造模组小鼠体质量均明显下降,小鼠出现体型消瘦、毛色枯槁、蜷缩聚堆、反应迟钝、少食、胆怯等表现。实验第22天（即给药第7天）,与A组相比,D、E组小鼠体质量下降不明显,小鼠进食饮水基本恢复,活动量有所增加;B、C、F组小鼠体质量明显降低（P＜0.05或P＜0.01）,走路摇晃无力甚至站立困难,C组小鼠最为严重。2.灰树花多糖对肠道感染白色念珠菌脾虚小鼠胸腺指数、脾指数的影响实验第22天,与A组相比,其余各组小鼠胸腺指数和脾指数无统计学意义;与B组相比,只有C组小鼠胸腺指数和脾指数降低,有统计学意义（P＜0.05）;与C组相比,D、E、F组小鼠胸腺指数均增高（P＜0.01或P＜0.05）,但D、E、F组之间无统计学差异,且只有F组小鼠脾指数升高（P＜0.05）,有统计学意义。3.灰树花多糖对肠道感染白色念珠菌脾虚小鼠小肠组织形态的影响实验第22天,光镜下观察,A组小鼠小肠黏膜完整,绒毛排列整齐,肌层薄厚均匀适中。B组小鼠与A组相比差别并不显著,偶见小肠绒毛排列不整齐。C组小鼠小肠黏膜病理改变最为突出,主要表现为小肠绒毛缺失甚至断裂、间距增大、排列不整齐、黏膜下层有炎细胞浸润、出现间质疏松水肿甚至有肠黏膜脱落。三组药物治疗组小鼠小肠黏膜病理改变有缓解趋势,D、F组仍可见到一些间质水肿、炎细胞浸润的情况,而E组小鼠小肠组织形态已接近于正常组。4.灰树花多糖对肠道感染白色念珠菌脾虚小鼠肠组织TLR4/My D88/NF-κB信号通路相关分子表达水平的影响实验第22天,与A组比较,除B组外,C、D、F组小鼠肠组织TLR4、My D88、NF-κB m RNA表达水平均升高（P＜0.01或P＜0.05）,而E组小鼠只有TLR4 m RNA表达水平显著增高（P＜0.01）;与B组比较,C、D、E、F组小鼠肠组织TLR4 m RNA表达水平均显著升高（P＜0.01）,C、D、F组小鼠肠组织My D88、NF-κB m RNA表达水平均也显著升高（P＜0.01）;与C组比较,D、E、F组小鼠肠组织TLR4、My D88、NF-κB m RNA表达水平均降低（P＜0.01或P＜0.05）,其中E组下降最为显著;与D、F组比较,E组小鼠肠组织TLR4、My D88、NF-κB m RNA表达水平均降低（P＜0.01或P＜0.05）,而D、F组无统计学差异。5.灰树花多糖对肠道感染白色念珠菌脾虚小鼠肠组织IL-6、MCP-1含量的影响实验第22天,与A组比较,只有B组小鼠肠组织IL-6含量无统计学差异,其余各组小鼠肠组织IL-6、MCP-1含量均升高（P＜0.05或P＜0.01）;与B组比较,C组小鼠肠组织IL-6、MCP-1含量均升高（P＜0.05或P＜0.01）,而D、F组小鼠肠组织只有IL-6的含量升高（P＜0.05）;与C组比较,D、E、F组小鼠肠组织IL-6、MCP-1的含量均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）;与D组比较,E组小鼠肠组织IL-6、MCP-1的含量均降低（P＜0.05或P＜0.01）,F组小鼠肠组织MCP-1的含量降低（P＜0.05）;与E组比较,F组小鼠肠组织IL-6的含量较高（P＜0.05）,差异具有统计学意义。结论:1.灰树花多糖可增加肠道感染白色念珠菌脾虚小鼠体质量,改善其一般状态,促进肠道炎症损伤恢复。2.灰树花多糖可通过下调肠道感染白色念珠菌脾虚小鼠肠组织TLR4/My D88/NF-κB信号通路相关分子表达水平,降低肠组织IL-6和MCP-1含量。