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背景:
椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IVD)是椎间盘突出、椎体滑脱、椎管狭窄等脊柱疾病的首要病因。研究证实,占椎间盘体积1%的髓核细胞在维持正常椎间盘细胞和细胞外基质平衡以及在修复退变的椎间盘过程中发挥着核心作用。肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)是人体中重要的细胞因子,存在于多种组织与细胞,发挥促进细胞增殖、基质表达、血管新生、抑制细胞凋亡等作用,在生命的器官发生、形态形成、个体发育以及组织修复中发挥作用。通过肝细胞生长因子对髓核细胞作用,研究髓核细胞增殖活性以及细胞外基质表达变化,为修复退变的椎间盘寻求切实可靠的方法。
目的:
1.探讨肝细胞生长因子(HGF)对体外培养的人退变髓核细胞的生物学作用。
2.研究肝细胞生长因子与胰岛素样生长因子联合作用对人退变髓核细胞的影响。
方法:
收集人退变髓核组织标本,分离培养髓核细胞;免疫组织化学法检测髓核细胞Ⅱ型胶原表达,HE染色观察细胞形态;免疫组化染色观察HGF受体在髓核细胞中表达;设立HGF:0ng/ml、5ng/ml、50ng/ml、500ng/ml组,采用MTT法测细胞生长曲线,筛选HGF最佳作用浓度;选取第3代髓核细胞,实验分HGF组、HGF+IGF组、IGF组、对照组,RT-PCR检测Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX9 mRNA表达;流式细胞术测定细胞增殖的周期。
结果:
免疫组化Ⅱ型胶原染色可见细胞外和胞浆内棕褐色颗粒;HE染色细胞核染成紫色;免疫组化显示髓核细胞表达HGF受体;MTT法提示不同浓度肝细胞生长因子对体外培养的人退变髓核细胞均有明显的促增殖作用,与对照组相比差异均有意义,50ng/ml是实验中肝细胞生长因子的最佳作用浓度;HGF、HGF+IGF、IGF刺激后髓核细胞进入增殖期比例增加,同时促进髓核细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX9mRNA表达量增加,其中HGF+IGF效果更为显著。
结论:
1.人退变髓核细胞存在HGF受体;
2.HGF对体外培养的人退变的髓核细胞有促增殖作用,可以促进细胞外基质表达;HGF与IGF联合作用效果优于两者单独作用。