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肝癌是来源于肝细胞或肝内胆管上皮细胞的恶性肿瘤,其中原发性肝细胞肝癌占肝脏所有恶性肿瘤的85%以上。肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)的发生率在全球常见的恶性肿瘤中高居第五位,由于其早期诊断困难,恶性程度高,并且很难对其进行有效的放疗和化疗。全世界每年新诊断的肝癌患者约70万例,其中超过50%以上的病例发生在中国。肝癌恶性程度高,进展迅速,预后极差,是全球癌症相关死亡的第三大原因。仅仅手术治疗并不能满足临床需要,目前的主要治疗手段包括手术切除、放化疗、介入治疗等,但总体的治疗效果并不令人满意,因为HCC早期缺少特异性表现,所以很多患者发现病变后已失去根治性的治疗机会,因此,HCC成为了全球恶性肿瘤中的第三大死亡原因,造成每年超过60万人死亡,严重威胁着人类的生命和健康。因此,阐明HCC发生发展及其转移复发的分子机制,进一步寻找更为有效的抗肿瘤方法对HCC的治疗具有重要的意义。阿片受体一直是科学研究领域中的研究热点之一,mu阿片受体(mu opioid receptor, MOR)属于阿片受体家族,也是三大经典阿片受体之一,其与细胞的存活和增殖密切相关。mu片受体由398个氨基酸残基组成,其N末端含有5个糖基化位点。在新近的研究中发现mu阿片受体有着影响肿瘤进程的作用。研究发现mu阿片受体在肝细胞膜上有大量表达,并且参与了肝肿瘤,急性肝炎,肝纤维化等肝脏疾病的发生和发展。而最早被克隆的Delta阿片受体(delta opioid receptor,DOR)也属于经典的三大阿片受体之一,MOR和DOR同属于G蛋白偶联受体,DOR由372个氨基酸残基组成。在人体多个器官及组织中具有表达。近年来,随着对DOR功能研究的逐渐深入,发现其在肝脏疾病的发生、发展过程中发挥着重要的调节作用。DOR主要涉及细胞的存活与增殖。而在次之前,我们课题组的研究已经表明DOR在肝细胞及组织中具有表达,并且在活化DOR的同时发现其有对抗肝细胞凋亡的作用。而DOR的这些保护作用归功于DOR序列的激活。细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)家族中最先被发现了解最多的成员。ERK包括了两种异构体ERK1和ERK2,两个磷酸化受体位点即酪氨酸和苏氨酸被谷氨酸残基分隔开来,故其磷酸化位点基序是TEY。目前认为,P38和JNK属于“应激诱导”的MAPK。研究发现,ERK信号转导通路涉及范围广泛的生物活动并且可以引起细胞生长、增殖与凋亡。有研究表明Delta受体可以通过G-protein-或-arrestin依赖的机制去活化ERK通路。蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)是一经典类型苏氨酸激酶并且广泛表达于人细胞中。在静息状态下,细胞内PKC以无效的形式分布在细胞质中。外部因素的刺激后,PKC从细胞质转移到细胞膜并被激活。PKC信号转导通路是涉及范围广泛的生物活动,特别是介导多种细胞的增殖和分化。研究发现,PKC参与肝脏缺血预处理保护。正常细胞和肝肿瘤细胞的增殖和凋亡与PKC密切相关。我们先前的研究结果表明,DOR与磷酸化PKC共享一个共同通路。目前,关于MOR及DOR在肝脏肿瘤方面的研究比较少,还有很多问题等待人们去探索。在我们的研究中使用Western blot、免疫组化、共聚焦显微镜及流式细胞仪等手段从蛋白质层面探讨MOR、DOR在人肝癌中的表达情况及DOR调控肝癌细胞凋亡进程的作用。目的：1.观察DOR及MOR在人肝癌组织及细胞中的表达情况。2.观察DOR对人肝癌细胞凋亡的调控作用及信号转导机制。方法：1.选取20例人肝癌组织和正常肝细胞株(LO2),肝癌细胞株(HepG2)等利用免疫组化、Western blot和共聚焦显微镜检测DOR、MOR蛋白的表达。2.选取肝癌细胞株(HepG2),利用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot分析相关蛋白表达,3.选取肝癌细胞株,利用流式细胞仪检测线粒体膜电位变化,Western blot分析相关蛋白表达。结果：1.肝癌组织中MOR和DOR均有表达。MOR和DOR主要集中分布在人肝癌细胞膜表面和胞浆中。2.在人肝癌细胞培养基中加入过氧化氢可以导致肝癌细胞凋亡,并且细胞凋亡的数目随过氧化氢浓度的变大而增加。3.激动DOR抑制过氧化氢造成的肝癌细胞凋亡,而活化DOR可引起PKC蛋白及其磷酸化水平增加,下调DOR可起到相反的作用。下调DOR可导致ERK蛋白及其磷酸化水平下降,PKC抑制剂也能产生相同作用,同时发现线粒体的膜电位下降,Bcl-2和Cyt C表达降低,Bax表达增高。结论：1.肝癌组织及细胞中存在DOR及MOR的表达,主要分布在细胞膜及胞浆。2.DOR可明显调控肝癌细胞的凋亡进程。3.DOR对肝癌凋亡调控与PKC-ERK及线粒体信号转导途径相关。