背景:Hedgehog(Hh)信号通路是在研究果蝇基因突变遗传分析时发现的,对机体多种器官发育起着重要的作用。近年来越来越多的研究发现Hh信号通路与多种肿瘤的发生发展亦密切有关,比如基底细胞癌、非小细胞肺癌、膀胱癌和胰腺癌等。在级联Hh信号通路中,转录因子Gli是其级联传导的末点,因此,又有人称之为Hh/Gli信号通路。Suppressor of Fused(SuFu)是Hedgehog(Hh)信号通路最保守的关键组分之一,在Hh信号通路中发挥重要作用。有研究报道SuFu可以抑制Hh信号通路的活性,但其调节Hh信号通路的机制还不是很清楚。Nek2A是丝氨酸/苏氨酸激酶Nek家族蛋白中的一员,主要调节细胞中的中心体。Nek家族蛋白主要有3种剪切形式,分别是Nek2A、Nek2B和Nek2C,在脊椎动物中主要以Nek2A和Nek2B两种剪切形式存在。由于Nek2在细胞有丝分裂以及癌症相关的信号转导通路中重要的调节作用,其已成为一个重要的致癌基因。在Nek2高表达的肿瘤中,患者表现出不良预后。我们前期的研究发现NIMA相关表达激酶2A(Nek2A)与Hh信号通路抑制因子SuFu相互作用,鉴于Nek2A和SuFu在肿瘤中发挥的重要作用及他们之间的相互作用,研究Hh/SuFu/Nek2A之间的相互作用将会为解决人类疾病提供一个新的思路。目的:1、研究Nek2A对SuFu的调控机制;2、分析Nek2A与Hh信号通路之间的相互作用;3、阐明Gli1/2调控NEK2A的分子机制。方法:1、Western blot检测Nek2A对SuFu及Hh信号通路各组份蛋白表达的影响;2、免疫共沉淀检测Nek2A对SuFu蛋白稳定性的影响;3、Real-time PCR检测Nek2A对Hh信号通路各组分mRNA的影响;4、双荧光素报告基因和染色质免疫共沉淀实验检测Gli1/2调控NEK2A转录的分子机制。结果:1、Western blot实验结果表明Nek2A抑制SuFu泛素化降解;2、Western blot和Real-time PCR实验结果表明干扰Nek2A激活Hh信号通路;3、Western blot和Real-time PCR实验结果表明Hh信号通路调节Nek2A;4、双荧光素报告基因和染色质免疫共沉淀实验结果表明NEK2A是Gli1/2的靶基因。结论:Gli1/2直接激活NEK2A,增加的Nek2A蛋白与SuFu相互作用进而增加了SuFu的稳定性。SuFu随后抑制Gli1/2进入细胞核,反过来抑制了Gli1/2对NEK2A的转录激活功能。