【摘 要】
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目的探讨使用小分子化合物联合单个转录因子(SF1)使人包皮成纤维细胞(human foreskin fibroblasts,HFFs)重编程为具有睾酮分泌功能的Leydig样细胞的可行性。方法分离培养HFFs,取第2-3代细胞转染SF1过表达病毒。表达稳定后(第4天),用小分子化合物(A 83-01、BIX 01294、CHIR99021、forskolin、DAPT、purmorphamine、
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目的探讨使用小分子化合物联合单个转录因子(SF1)使人包皮成纤维细胞(human foreskin fibroblasts,HFFs)重编程为具有睾酮分泌功能的Leydig样细胞的可行性。方法分离培养HFFs,取第2-3代细胞转染SF1过表达病毒。表达稳定后(第4天),用小分子化合物(A 83-01、BIX 01294、CHIR99021、forskolin、DAPT、purmorphamine、SU 16f,即“ABCFDPS”)的不同组合对细胞进行联合诱导,隔天换液并收取细胞上清进行睾酮分泌功能鉴定,逐步筛选出最优组合。同时,用qRT-PCR、免疫荧光及western blotting分别从RNA和蛋白水平检测细胞中Leydig细胞(Leydig cells.LCs)特异性标记基因(STAR、CYP11A1、CYP17A1、HSD3B1、HSD17B3)的表达情况。结果ABCFDPS与SF1联合诱导的Leydig样细胞具有睾酮分泌功能。筛选后得出的最优组合为forskolin、DAPT、purmorphamine(“FDP”)。FDP与SF1联合诱导第7、14、21、28天,LCs特异性标记基因均呈上调表达。免疫荧光及western blotting示CYP11A1、HSD3B1、HSD17B3在蛋白水平均有阳性表达。结论小分子化合物联合单个转录因子SF1能使HFFs重编程为具有睾酮分泌功能的Leydig样细胞。
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