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肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)是以细胞外基质(extracellular matrix,ECM)过度沉积为特点的慢性呼吸系统疾病。PF发病机制尚不明确,且缺乏有效治疗药物逆转PF或阻断其向呼吸衰竭进展。因此,进一步阐明PF的发生机制、寻找防治PF的有效靶点和治疗药物仍是目前医学界的研究热点和临床难题。玉屏风散由黄芪、白术、防风三味中药组成,是中医经典方剂,可预防和治疗呼吸道病毒感染,抑制慢性支气管炎。本课题组前期研究结果显示其有效部位玉屏风总苷(total glucosides from Yupingfeng,YTG)有抗炎和免疫调节活性,且黄芪甲苷(YTG组成成分之一)能抑制高迁移率组蛋白B1(high-mobility group box 1,HMGB1)的活性、减少胶原分泌,减轻心肌纤维化和肝纤维化。然而,YTG对PF是否具有保护作用尚未见报道。目的本项目拟通过博来霉素A5(bleomycin A5,BLM)诱导的PF大鼠模型,探究YTG对PF的保护作用及其部分机制。方法将120只雌性SD大鼠随机分为生理盐水(normal saline,NS)组、博来霉素A5组(BLM)、强的松(prednisone,Pred)组、玉屏风汤剂(Yupingfeng Decoction,YD)组、玉屏风总苷(YTG)-低剂量组和YTG-高剂量组。采用气管内一次性滴注BLM(5 mg/kg)复制PF大鼠模型,NS组大鼠滴注等体积生理盐水。造模第2 d开始,连续给予相应治疗组大鼠以5 mg/kg/d Pred、2.8 g/kg/d YD和5、10 mg/kg/d YTG灌胃28 d。在造模后第0、7、14、28天记录各组大鼠体重变化。分别在第14 d、28 d处理各组大鼠一半,收集血液(分离血清)和肺组织,全肺称重(观察肺系数的变化),然后进行以下实验:(1)通过肺组织切片的H&E染色和Masson胶原染色观察YD和YTG(5 mg/kg/d)干预对大鼠肺泡炎和PF程度的影响,同时测定肺组织中的羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量;(2)检测YTG(5、10 mg/kg/d)干预组肺匀浆中的?型胶原(type?collagen,Col-?)含量和血清中层粘连蛋白(laminin,LN)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)、HMGB1水平;(3)采用免疫组化(immunohistochemistry,IHC)分析观察YTG干预后HMGB1、E-钙黏素(E-cadherin,E-cad)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达情况;(4)采用Western blot分析检测YTG干预对大鼠肺组织中HMGB1、E-cad、α-SMA和波形蛋白(vimentin,Vim)表达的影响。结果玉屏风汤剂(2.8 g/kg/d)和YTG(5 mg/kg/d)可不同程度减轻BLM引起的大鼠肺泡炎和PF程度、降低肺系数、抑制大鼠体重的降低、减少HYP含量,以YTG(5 mg/kg/d)的作用较为明显。同时,YTG(5、10 mg/kg/d)也能不同程度降低BLM诱导的Col-Ⅰ、LN、HA和HMGB1水平,下调肺组织中HMGB1的表达水平和间质细胞标志蛋白α-SMA、Vim的蛋白表达,上调上皮细胞标志物E-cad的蛋白水平,尤其是YTG(10 mg/kg/d)组。结论1.YTG(5 mg/kg/d)和YD(2.8 g/kg/d)能不同程度减轻BLM诱导的大鼠PF,且前者的抗PF作用优于后者。2.YTG对PF大鼠的保护作用可能与减少HMGB1释放,抑制EMT进程,进而降低ECM沉积有关,这为探索PF新的防治策略提供了实验参考。3.HMGB1可能是防治PF的一个有效靶点。