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第一部分骨髓间充质干细胞的分离、培养和鉴定目的:从SD大鼠体内成功分离骨髓间充质干细胞(BMSCs),并检测细胞多向分化的能力以及其表面上的相应CD分子表达,为后续的支架上种子细胞提供明确的研究背景。方法:1.利用全骨髓贴壁法分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞。2.将骨髓间充质干细胞进行成骨,成脂两个方向的分化诱导。3.利用流式细胞术检测BMSCs表面的相应CD分子表达。结果:1.在体外进行分离培养的骨髓间充质干细胞形态主要为梭形,排列似放射状。2.成骨分化的茜素红染色,碱性磷酸酶ALP染色双阳性;成脂分化的油红O染色阳性。3.流式细胞术检测表明第3代骨髓间充质干细胞CD44和CD90双阳性率高达93.9%。结论:本实验能为后续支架上的种子细胞提供明确的研究背景。第二部分3D多孔复合支架的制备及其生物相容性检测目的:使用3D打印机制备由PLA/HA复合材料组成的多孔支架,通过体外体内实验检测其生物相容性。方法:1.使用3D打印机制备PLA/HA复合物多孔支架,测量支架孔隙率,并利用Micro CT和SEM观察支架结构。2.参照医疗器械生物学评价标准(GB/T16886)提取支架浸提液,根据美国药典五级毒性评级标准运用细胞计数试剂盒CCK-8检测支架浸提液的细胞毒性。3.采用细胞计数试剂盒CCK-8实验评价大鼠骨髓间充质干细胞与支架复合培养的黏附增殖情况。4.选用荧光显微镜、扫描电子显微镜观察细胞与支架共培养之后其形态学的变化。5.通过SD大鼠皮下植入支架试验术后1、3、4w取组织做切片HE染色,观察支架周围炎性细胞以及新生血管,成纤维细胞的情况结果:1.成功制备了3D复合多孔支架,支架孔隙率为0.6763±0.03592,Micro CT扫描及SEM扫描结果显示支架孔径大小统一,层次分明,支架内有HA颗粒均匀分布,支架表面有大小一致的细小孔隙。2.PLA/HA复合多孔支架不同浓度浸提液细胞毒级评分为0级或1级,无细胞毒性。3.细胞与支架共培养后,支架上粘附的细胞随着时间的延长而增加(P<0.05)。4.BMSCs在支架上黏附,增殖,迁移,显示出良好的细胞相容性。5.皮下植入支架实验结果显示,在植入的PLA/HA多孔复合支架上,炎性细胞数量随着时间的延长逐渐减少,支架内新生毛细血管数目随着时间延长增加。结论:此研究提示了通过3D打印技术可以制作不同的生物复合材料,同时也显示了3D打印PLA/HA复合多孔支架具有良好的细胞相容性和组织相容性。