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背景和目的艾拉莫德是一种新型小分子免疫调节剂,现在的研究已证明此药具有多种免疫调节功能,包括:能够抑制滑膜细胞TNF-α及单核细胞NF-κB通路、增加单核细胞膜稳定性、抑制大鼠关节CIA发生、下调IL-17、IL-1、IL-6、IFN-γ等多种炎症因子、抑制IL-17通路等。在本课题组和国外研究者分别完成的RA临床试验中,艾拉莫德显示出和MTX相当的疗效及安全性。前期基础和临床研究均提示艾拉莫德对体液免疫可能存在抑制作用。体外实验发现艾拉莫德能够抑制人和小鼠B细胞的免疫球蛋白产生、免疫重建实验发现艾拉莫德可抑制RA患者滑膜组织免疫球蛋白的产生;临床试验也发现艾拉莫德组RA患者血清免疫球蛋白和类风湿因子水平出现下降。鉴于RA和SLE具有包括自身抗体在内的多种共同发病机制,我们推测艾拉莫德对SLE可能亦存在治疗作用。MRL/lpr小鼠是一种经典的自身抗体介导的类红斑狼疮疾病模型。它们由于MRL品系小鼠基因背景和淋巴细胞凋亡障碍的共同作用而发病,在生命后期可出现免疫性肾炎、淋巴器官肿大、关节炎、皮损等多种改变,体内出现丰富自身抗体。小鼠外周淋巴细胞出现多重失衡:浆细胞增多,正常T、B细胞比例因B220+T细胞累积而降低,滤泡B细胞减少而边缘区B细胞增多,未成熟B细胞增多,等等。为进一步验证我们对艾拉莫德治疗SLE的猜想,本研究选择MRL/lpr小鼠,系统观察了艾拉莫德对其的治疗作用,并初步探讨了这个药物在此模型中可能的作用机理。材料和方法选择雌性MRL/lpr小鼠,分别随机给药艾拉莫得、空白载体溶液作为安慰剂或环磷酰胺作为阳性对照。选择不携带lpr基因的野生型雌性BALB/c小鼠为背景对照。采用BCA法定期定量检测小鼠尿蛋白浓度,放免法定期检测血清抗ds DNA抗体的水平,ELISA法检测血清补体C3及免疫球蛋白各亚型水平,血细胞分析仪及全自动生化仪定期检测给药小鼠的全血细胞计数及肝肾功能。小鼠肾脏标本进行H&E染色,由肾脏病理专家盲法读片,半定量评估肾小球累及及肾小血管累及情况。免疫组化对小鼠肾脏Ig G及CD20染色。分离小鼠脾脏淋巴细胞,流式检测其中B细胞各亚群及浆细胞比例。脾脏淋巴细胞的BAFF、IL-6、IL-21、IL-17A表达水平采用实时定量荧光PCR检测,血清BAFF水平采用ELISA法检测。小鼠脾细胞进行annexin V/PI染色,流式鉴定其中凋亡细胞比例。采集健康人外周血总B细胞,体外F(ab’)2 anti-Ig M、IL-21、IL-4及CD40L联合刺激使其增殖,并进行Brd U及7-AAD染色,流式检测细胞周期,体外观察艾拉莫得对正常人B细胞增殖及凋亡的影响。结果艾拉莫德可明显缓解MRL/lpr小鼠类狼疮样疾病病情。小鼠经艾拉莫德治疗后蛋白尿发生时间和水平均显著低于安慰剂组,肾脏病理显示免疫性肾炎病变轻于安慰剂组,盲法评定的肾小球损伤及血管周围炎症积分差异具有统计学差异。艾拉莫德组小鼠抗ds-DNA抗体水平显著低于安慰剂组,低补体血症、高免疫球蛋白血也同时得到明显缓解。免疫组化显示艾拉莫德组小鼠肾脏Ig G免疫复合物沉积显著少于安慰剂组,半定量吸光度计算显示两组具有显著统计学差异。以上结果同时证实了艾拉莫德对小鼠体液免疫的抑制作用。我们进一步发现艾拉莫德对MRL/lpr小鼠外周淋巴细胞具有多种调节作用。外周异常B220+T细胞及浆细胞比例经艾拉莫德治疗后下降,而外周总B细胞比例出现恢复,趋向于正常BALB/c小鼠水平;同时作为靶器官的肾组织中CD20+B细胞的浸润在艾拉莫德治疗后显著减少。艾拉莫德组小鼠脾脏浆细胞数量显著少于安慰剂组,与血清免疫球蛋白检测结果相呼应。小鼠脾脏内异常升高的生发中心、边缘区B细胞和异常降低的滤泡B细胞亚群比例经过艾拉莫得治疗后均得到部分纠正;艾拉莫德组脾脏内异常增多的未成熟过度型B细胞比例也显著低于安慰剂组;而环磷酰胺上述效应并不明显。MRL/lpr小鼠脾细胞及血清中促进B细胞活化的多种细胞因子,包括BAFF、IL-6、IL-21、IL-17A水平在艾拉莫德给药后出现明显下降,与环磷酰胺效果相近。体内及体外艾拉莫德处理后的淋巴细胞凋亡及增殖情况与安慰剂组相比,均无统计学差异,提示艾拉莫德对细胞增殖及凋亡无显著影响。长期给药(20周)过程中未观察到艾拉莫德对MRL/lpr小鼠存在明显毒副作用。结论艾拉莫德可缓解MRL/lpr小鼠类狼疮样疾病,其机制可能通过非抗增殖的方式纠正MRL/lpr小鼠异常的B细胞分化功能发挥作用。本研究的结果提示艾拉莫德可能是一种潜在的狼疮治疗新药。