基于结核分枝杆菌异柠檬酸裂合酶的高通量药物筛选模型的构建与应用

来源 :西南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shi123abc
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本文通过PCR方法获得ICL的编码序列,克隆至原核表达载体pQE30;将重组质粒pICL-pQE30转化大肠杆菌JM109,优化可溶性重组蛋白的表达,Nisepharose纯化可溶性重组蛋白。研究酶反应的线性范围以及反应时间,考察DMSO对ICL活力的影响,对测活条件进行优化,确定反应体系,并对高通量筛选模型进行评价。建立ICL抑制剂高通量筛选的标准化操作流程。对475个中药提取物进行筛选,初筛和双复孔复筛后,挑选抑制率大于>50%的样品进行浓度梯度测定,计算IC50。结果显示重组ICL基因工程菌构建成功,纯化方案简单可行,得到的重组ICL纯度达到90%以上,酶活力达到25676U/L,模型参数S/N和Z因子的值分别为12.7和0.72,说明该模型适用于高通量筛选。在对475种中药提取物的筛选中,筛选得到两种对ICL有明显抑制作用的中药XHD-1和XHD-2提取物,其IC50分别为0.0477±0.0169和0.0182±0.0009mg/ml。对其进一步分离、纯化活性物质,可望获得抑制活性更强的重组结核分枝杆菌ICL的中药抑制剂,为抗结核药物的开发打下了良好的基础。
其他文献
摘要:初中阶段的整个教学体系中,数学课程无疑是最具有难度的、也最难以学好的,其知识相对来说比较抽象而且定义和概念也都是高度凝练和总结而成的,对于初中生读完理解起来比较困难。到了九年级就更是如此。平时,基础知识掌握不牢固,等到九年级许多知识点混淆或遗忘!导致一听就会,但自己拿起题来,老感觉无从下手!找不到解题的突破口。这就造成了一部分学生无法获得良好的学习成绩,学困生的比例非常高。  关键词:九年级
随着全球卫星导航系统的不断发展,导航频段越来越拥挤,为实现频段共用与频谱分离,BOC信号应运而生。MBOC是对多个BOC信号进行复合而得到的一种新的信号调制方式,被应用到GPS L1C
学位
我国是汽车制造业的重要市场,但是汽车制造业的发展受到宏观经济的影响,面临激烈的市场竞争.许多汽车制造企业通过降本增效的方式来应对经济下行、市场竞争的调整.由此可见,
构建科学、合理的绩效考核与薪酬分配制度,不但可以充分调动医务人员的工作积极性,还可以推动公立医院实现现代化、精细化的管理,破除公立医院逐利机制,符合新医改要求.本文