目的:垂体泌乳素腺瘤严重危害人体身心健康,目前临床治疗药物有限且副作用明显,急需探索其发病机制和新的治疗方法。基于本课题组的前期研究结果,本研究拟探索MAPK14在泌乳素腺瘤中的作用和机制。并研制麦芽总生物碱颗粒剂。方法:运用组织免疫荧光检测法探索MAPK14在人泌乳素腺瘤中的表达和定位;运用雌激素诱导和DRD2敲除方法分别制备泌乳素腺瘤的小鼠模型。研究MAPK14基因在垂体泌乳素腺瘤中的作用;使用siRNA转染GH3细胞,研究敲低MAPK14基因对GH3细胞产生PRL的影响;麦芽总生物碱颗粒剂的制备工艺研究。具体方法如下:（一）收集垂体泌乳素腺瘤患者和其他垂体瘤（PRL阴性）患者的垂体标本,制备成石蜡标本,用组织免疫荧光法检测MAPK14在人泌乳素腺瘤中的表达和定位。随机选取4例人垂体泌乳素腺瘤石蜡切片标本作为泌乳素腺瘤组;4例其他垂体瘤石蜡切片标本作为对照组。将其切片标本用组织免疫荧光法标记MAPK14和PRL蛋白,检测其表达情况和共定位现象。（二）建立雌激素诱导泌乳素腺瘤小鼠模型,研究MAPK14基因敲除对泌乳素腺瘤的影响。所有小鼠分为3组:WT组;E2组;MAPK14^-/-E2组。模型的制备方法为:将苯甲酸雌二醇注射液按每次20 mg/kg的剂量注射入小鼠腹腔,每4天进行一次,持续32天。每天观察模型动物的进食及活动状况。雌二醇注射32天后,采集小鼠血浆用ELISA法检测PRL的表达,取小鼠垂体组织称重后,每组随机选取3个提取总RNA,用Real-Time PCR法检测小鼠垂体中PRL基因的表达。另外每组3个提取其总蛋白,用Western blot法检测小鼠垂体中MAPK14和PRL蛋白的表达。（三）小鼠敲除DRD2后制备泌乳素腺瘤模型,研究MAPK14基因敲除对泌乳素腺瘤的影响。给予规范食物和水饲养的8月龄雌性DRD2^-/-小鼠垂体增生,泌乳素腺瘤形成,即为泌乳素腺瘤模型小鼠。所有小鼠分为3组:WT组;DRD2^-/-组;DRD2^-/-MAPK14^+/-组。采集小鼠血浆用ELISA法检测PRL的表达,取小鼠垂体组织称重后,每组随机选取3个提取总RNA,用Real-Time PCR法检测小鼠垂体中PRL基因的表达。另外每组3个提取其总蛋白,用Western blot法检测小鼠垂体中MAPK14和PRL蛋白的表达。（四）使用siRNA转染GH3细胞,研究MAPK14基因敲低对GH3细胞产生PRL的影响。分组为:Blank组,NC组,荧光标记转染对照组,MAPK14 siRNA1（30 nM,50 nM,100 nM）,MAPK14 siRNA2（30 nM,50 nM,100 nM）,MAPK14 siRNA3（30 nM,50 nM,100 nM）,MAPK14siRNA3（100 nM,200 nM,300 nM）。用Real-Time PCR法和Western blot法检测各组细胞中MAPK14和PRL的表达。（五）用湿法制粒制备麦芽总生物碱颗粒剂。通过检测颗粒的成型率、堆密度、休止角和吸湿性,来筛选出最佳辅料配方。以成型率为指标,选择麦芽总生物碱与辅料的比例。以软材达到“手握成团,轻触即散”且颗粒大小均匀的制粒要求,选择最佳湿润剂。结果:（一）组织免疫荧光检测结果显示,人垂体泌乳素腺瘤标本中PRL和MAPK14出现共定位现象。与对照组比较,人垂体泌乳素腺瘤组中PRL的表达显著增加（P<0.001）,MAPK14的表达也显著增加（P<0.001）。（二）雌激素诱导泌乳素腺瘤小鼠模型成功建立。称重结果显示,与WT小鼠比较,注射E2小鼠垂体组织/小鼠体重（mg/g）的值显著增加（P<0.001）,与注射E2小鼠比较,注射E2的MAPK14^-/-小鼠垂体组织/小鼠体重（mg/g）的值显著降低（P<0.001）。ELISA检测结果显示,与WT小鼠比较,注射E2小鼠血浆中PRL蛋白的含量显著增加（P<0.01）,与注射E2小鼠比较,注射E2的MAPK14^-/-小鼠血浆中PRL蛋白的含量显著降低（P<0.01）。Real-Time PCR检测结果显示,与WT小鼠比较,注射E2小鼠垂体组织中PRL基因表达显著增加（P<0.01）,与注射E2小鼠比较,注射E2的MAPK14^-/-小鼠垂体组织中PRL基因表达显著降低（P<0.05）。Western blot检测结果显示,与WT小鼠比较,注射E2小鼠垂体中PRL蛋白表达显著增加（P<0.01）,与注射E2小鼠比较,注射E2的MAPK14^-/-小鼠血浆中PRL基因表达显著降低（P<0.05）。（三）DRD2敲除小鼠研究结果显示,与WT小鼠比较,DRD2^-/-小鼠垂体组织/小鼠体重（mg/g）的值显著增加（P<0.001）,与DRD2^-/-小鼠比较,DRD2^-/-MAPK14^+/-小鼠垂体组织/小鼠体重（mg/g）的值显著降低（P<0.001）。ELISA检测结果显示,与WT小鼠比较,DRD2^-/-小鼠血浆中PRL蛋白的含量显著增加（P<0.01）,与DRD2^-/-小鼠比较,DRD2^-/-MAPK14^+/-小鼠血浆中PRL蛋白的含量显著降低（P<0.05）。Real-Time PCR检测结果显示,与WT小鼠比较,DRD2^-/-小鼠垂体组织中PRL基因表达显著增加（P<0.001）,与DRD2^-/-小鼠比较,DRD2^-/-MAPK14^+/-小鼠垂体组织中PRL基因表达显著降低（P<0.01）。Western blot检测结果显示,与WT小鼠比较,DRD2^-/-小鼠垂体组织中PRL蛋白表达显著增加（P<0.01）,与DRD2^-/-小鼠比较,DRD2^-/-MAPK14^+/-小鼠垂体组织中PRL蛋白表达显著降低（P<0.05）,与WT小鼠比较,DRD2^-/-小鼠垂体组织中MAPK14蛋白表达显著增加（P<0.001）,与DRD2^-/-小鼠比较,DRD2^-/-MAPK14^+/-小鼠垂体组织中MAPK14蛋白表达显著降低（P<0.01）。（四）MAPK14 siRNA转染GH3细胞结果显示,与NC组比较,转染MAPK14 siRNA1（30 nM,50 nM,100 nM）,MAPK14 siRNA2（30 nM,50 nM,100 nM）,MAPK14 siRNA3（30 nM,50 nM,100 nM）的GH3细胞中MAPK14基因的表达显著降低（P<0.05,P<0.01）,导致PRL基因的表达显著降低（P<0.01,P<0.001）;与NC组比较,转染MAPK14siRNA3（100 nM,200 nM,300 nM）的GH3细胞中MAPK14基因的表达显著降低（P<0.001）,导致PRL基因的表达显著降低（P<0.001）。Western Blot检测结果显示,与NC组比较,转染MAPK14 siRNA1（30 nM,50 nM,100 nM）,MAPK14 siRNA2（30 nM,50 nM,100 nM）,MAPK14siRNA3（30 nM,50 nM,100 nM）的GH3细胞中MAPK14蛋白的表达显著降低（P<0.01）,导致PRL蛋白的表达显著降低（P<0.01,P<0.001）;与NC组比较,转染MAPK14 siRNA3（100 nM,200 nM,300 nM）的GH3细胞中MAPK14蛋白的表达显著降低（P<0.001）,导致PRL蛋白的表达显著降低（P<0.001）。（五）用湿法制粒制备麦芽总生物碱颗粒剂结果显示,最佳辅料配方为糊精:乳糖（1:1）时制剂效果最佳,麦芽总生物碱与辅料的比例为1:1为佳,80%乙醇为最佳湿润剂。结论:MAPK14促进了泌乳素腺瘤小鼠PRL的生成,抑制MAPK14可有效抑制泌乳素腺瘤的生成。使用湿法制粒可成功制备麦芽总生物碱颗粒剂。