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背景自身免疫性疾病（autoimmunediseases，AIDs）是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织器官损伤和功能障碍的疾病。病程呈慢性经过，病因不明，其病理特点主要是淋巴细胞和浆细胞的浸润。常见的AIDs包括类风湿关节炎（rheumatoidarthritis,RA）、系统性红斑狼疮（systemiclupuserythematosus,SLE）、皮肌炎（dermatomyositis,DM）和系统性硬化病（systemicsclerosis,SSc）等。相关研究表明，AIDs患者Th17细胞（Thelpercell17，辅助性T细胞17）比例明显增高，而Treg细胞（regulatoryTcell，调节性T细胞）比例减低，二者比例失衡导致AIDs的发生。目前国际上主要采用改变病情抗风湿药（diseasemodifyinganti-rheumaticdrugs,DMARDs）联合治疗AIDs。在世界范围内达成共识的联合方案以甲氨蝶呤（methotrexate,MTX）联合来氟米特（leflunomide，LEF）为代表。而我科经过数十年的基础研究及临床疗效观察已经证实联合使用周期特异性药物MTX和周期非特异性药物环磷酰胺（cyclophosphamide，CTX）治疗AIDs疗效优于MTX~+LEF，且副作用更小[1,2]。其主要作用机制不仅仅是杀灭异常增殖的淋巴细胞，更是调节淋巴细胞亚群尤其是Th17细胞与Treg细胞之间的平衡。本研究通过建立OVA（ovalbumin，卵清蛋白）免疫小鼠模型，观察联合使用周期特异性药物与周期非特异性药物对小鼠脾脏淋巴细胞（spleniclymphocyte,SpL）总数及其亚群CD4~+T细胞、Th17细胞和Treg细胞比例的影响，进一步从淋巴细胞亚群变化的角度验证联合用药的作用。目的1.研究MTX周期联合CTX对OVA免疫小鼠脾脏淋巴细胞总数、CD4~+T细胞、Th17细胞、Treg细胞百分比和Th17/Treg比值的影响，并绘制曲线图；2.探讨周期联合MTX和CTX调节OVA免疫小鼠脾脏Th17/Treg细胞平衡的作用机制；3.探讨影响OVA免疫小鼠脾脏淋巴细胞亚群变化的相关因素。方法选取84只雄性C57BL/6(H2b)小鼠，随机分为正常对照组（6只）和OVA免疫组（78只），按照文献方法建立OVA免疫小鼠模型[3]。OVA免疫后2天开始给药。给药前OVA免疫组根据拟用药不同随机分为4组：OVA模型组（24只）、MTX组（18只，3.03mg·kg-1·w-1）、CTX组（18只，80.88mg·kg-1·3w-1）和MTX~+CTX组（联合组，18只，MTX：3.03mg·kg-1·w-1，CTX：80.88mg·kg-1·3w-1）。进行9周动物实验。正常对照组（6只）和OVA模型组（随机抽取6只）于第0周处死，其他4组OVA免疫小鼠分别于给药第2、3、5、6、8、9周处死，无菌取脾并提取淋巴细胞，采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏淋巴细胞总数、CD4~+T细胞、Th17细胞和Treg细胞百分比的变化，进行统计分析，计算Th17/Treg比值，绘制曲线图。结果1.给药前，与正常对照组相比较，OVA免疫组小鼠的脾脏淋巴细胞总数、Th17细胞百分比和Th17/Treg均明显升高，差异具有统计学意义（P<0.05）；2.各给药组小鼠的脾脏淋巴细胞总数、Th17细胞百分比、Th17/Treg随着给药时间的延长，呈下降趋势，Treg细胞百分比呈上升趋势，具有统计学意义（P<0.05）；3.MTX联合CTX组各指标变化最为明显。第9周，与OVA组及单用药组比较，联合组脾脏淋巴细胞总数、Th17细胞百分比、Treg细胞百分比、Th17/Treg变化差异具有统计学意义（P<0.05）；与OVA组相比较，单用药组上述指标变化差异有统计学意义（P<0.05）；单用MTX组及单用CTX组之间上述指标间差异无统计学意义（P>0.05）；4.CTX组和MTX~+CTX组小鼠脾脏淋巴细胞总数在每次CTX给药后第2周即第2、5、8周降至最低，后缓慢恢复，但均低于给药前水平。结论1.DMARDs药物单独使用和联合用药均可抑制异常淋巴细胞增殖，且联合用药作用更强，更有效地调节Th17/Treg细胞之间的平衡；2.DMARDs药物对Th17细胞的杀伤作用强于Treg细胞，在用药间歇期，Th17细胞的恢复程度慢于Treg细胞；3.DMARDs药物干预后，机体炎性反应降低，免疫耐受增强，渐趋于恢复机体免疫平衡。