人多聚免疫球蛋白受体pIgR介导EMT的作用研究及机制初探

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多聚免疫球蛋白受体(pIgR)属于I型跨膜糖蛋白,可以与多聚免疫球蛋白A和多聚免疫球蛋白M特异性结合,通过穿胞转运,将它们从上皮细胞基底侧膜转运到顶膜,并最终分泌到外分泌液中去。MDCK是狗的肾上腺皮质细胞,该细胞株因适合作为上皮生物学模型而被广泛应用。在组织培养中,MDCK细胞能够形成上皮致密单层。本课题组前期实验利用真核转染技术,成功构建了人pIgR稳定高表达的MDCK细胞株(命名为MDCK-pIgR,阴性对照组细胞命名为MDCK-mock),在研究pIgR的极性转运时意外发现,MDCK-pIgR细胞株的增殖速加快,表型由柱状变为成肌纤维细胞样,并且,与MDCK-mock组细胞相比,这些细胞的运动性增强。进一步的表明pIgR的表达也许能够促进EMT的发生。本论文采用RNA干扰技术,研究pIgR介导EMT的作用。论文分三部分为内容。第一部分pIgR低表达细胞株的建立。设计并合成三种RNA干扰质粒,稳定转染MDCK-pIgR细胞,采用RT-PCR、Western-Blotting和免疫荧光化学技术检测干扰效率。结果显示,RNA干扰效果明显,可以用于后续的实验。第二部分pIgR介导MDCK细胞EMT的作用研究观察干扰组细胞与阴性对照组细胞形态变化,检测增殖相关指标,观察RNA干扰前后迁移、侵袭、粘附等细胞行为和软琼脂生长能力是否改变。结果显示,pIgR使MDCK细胞的形态发生显著变化,细胞的迁移、侵袭能力增强,而粘附力减弱,在软琼脂上的生长能力增强。以上结果说明,pIgR介导了MDCK细胞EMT的发生。第三部分pIgR介导EMT的可能分子机制初探在MDCK细胞模型中,pIgR的穿胞转运机制被广泛研究。在与配体结合或二聚化后,pIgR能够发生磷酸化。为了找到MDCK-pIgR细胞发生EMT的机制,我们采用RT-PCR、Western-Blotting等技术检测了ERK、Snail、角蛋白、F-actin,并采用IP方法探讨pIgR是否能够发生磷酸化调节细胞信号。推测pIgR介导EMT的可能分子机制为:pIgR的高表达促进ERK1/2磷酸化,上调Snail,下调E-钙粘素的表达,粘附连接破坏,细胞骨架重新排列,从而导致EMT的发生。而上述过程是由pIgR Tyr的磷酸化引起的。本论文的研究发现了pIgR在调节EMT中的作用,拓展了pIgR的研究领域。为pIgR的促肿瘤生成作用奠定了基础。提示pIgR是肿瘤治疗中的潜在靶点。基于进一步的评价,在特殊肿瘤组织中抑制pIgR的表达可能会成为阻断肿瘤转移的有效手段。
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