γδT细胞对EB病毒转化B淋巴细胞的免疫识别

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本研究的目的:γδT细胞与肿瘤免疫有着密切联系,本研究旨在通过建立EB 病毒(EBV)转化人类B 淋巴细胞的模型,从而研究细胞转化前后膜表面分子的表达情况变化及γδT细胞对其的杀伤作用,以期找到γδT细胞识别的肿瘤抗原,为肿瘤的诊断和治疗提供一定的帮助。所采用的方法:(1) 将EBV 与人类B 淋巴细胞共同培养,建立EBV 转化B 淋巴细胞的模型;(2)通过流式细胞仪检测EBV 转化前后B 淋巴细胞表面HSP60 和HSP70 的表达情况;(3)用MTT法检测γδT细胞对EBV 转化前后B 淋巴细胞的杀伤作用;(4)用抗HSP60、HSP70 抗体封闭EBV 转化后的B 淋巴细胞,测定γδT细胞对其的杀伤作用;(5)提取标本总RNA,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析EBV 转化前后B 淋巴细胞中MICA 基因的表达。本研究取得以下结果:(1)EBV 转化人的B 淋巴细胞和单个核细胞(PBMC)中的B 淋巴细胞获得成功,EBV 转化人的全血中的B淋巴细胞则未获成功;(2)正常B 淋巴细胞极少表达HSP60、HSP70,而EBV 转化后的B 细胞则几乎均表达HSP60 和HSP70 ;(3)自体γδT细胞对B 淋巴细胞有轻微的杀伤作用,而γδT细胞对EBV 转化后的B 淋巴细胞的杀伤作用较之正常B 淋巴细胞高出10 余倍;异体γδT细胞对转化前后B 淋巴细胞都有显著的杀伤作用;(4)γδT细胞对EBV 转化后B 细胞的杀伤作用可为抗HSP60 和HSP70 抗体所明显阻断;(5)正常B 淋巴细胞不表达MICA 基因;而EBV 转化后的B 淋巴细胞则表达MICA 基因。
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