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目的:研究HBx促进肝癌细胞增殖的机制,探讨HBx是否通过激活NF-κB/Cyclin D1信号通路促进Hep G2细胞增殖及阻断NF-κB通路对细胞增殖的影响。方法:以转染重组HBV X基因慢病毒载体的Hep G2细胞(Hep G2/HBx)为实验组,以转染慢病毒空载体组的Hep G2细胞(Hep G2/Mock)为阴性对照组,未转染的Hep G2细胞(Hep G2)为空白对照组。复苏和培养Hep G2/HBx、Hep G2/Mock、Hep G2细胞,提取胞浆蛋白和胞核蛋白,Western blot检测HBx表达。RT-PCR检测上述三种细胞NF-κB P65及P50在m RNA水平的表达;Western blot检测胞核蛋白NF-κB P65、NF-κB P50和Cyclin D1含量。使用CCK8方法检测不同浓度(0、1.5625、3.125、6.25、12.5、25μM)PDTC在不同孵育时间对Hep G2/HBx、Hep G2/Mock、Hep G2细胞生长的抑制情况。根据CCK8实验,选择最佳抑制浓度3.125μM及12.5μM的PDTC干预Hep G2/HBx细胞,阻断NF-κB的活化,Western blot检测胞核蛋白NF-κB P65、NF-κB P50和Cyclin D1含量变化。结果:Western blot检测示HepG2/HBx细胞的胞浆及胞核均有HBx表达,Hep G2/Mock、Hep G2细胞的胞浆及胞核未见HBx表达;RT-PCR检测发现Hep G2/HBx细胞的NF-κB P65及P50 m RNA表达与对照组相比无明显差异,差异无统计学意义(P>0.05);Western blot检测示Hep G2/HBx细胞的NF-κB P65、NF-κB P50和Cyclin D1蛋白在胞核内表达均较对照组高,其差异有统计学意义(P<0.05);CCK8检测显示PDTC同时抑制Hep G2/HBx、Hep G2/Mock、Hep G2三组细胞的增殖,但Hep G2/HBx细胞的生长受PDTC抑制较对照组显著,差异具有统计学意义(P<0.05);经不同浓度的PDTC干预处理后的Hep G2/HBx细胞的胞核蛋白NF-κB P65、NF-κB P50、Cyclin D1的表达明显被抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HBx通过激活NF-κB/Cyclin D1信号通路促进Hep G2细胞增殖。PDTC阻断NF-κB活化,降低Cyclin D1表达,抑制Hep G2细胞增殖。