【摘 要】
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目的利用神经细胞诱导培养基将胎盘间充质干细胞（placental mesenchymal stem cells,PMSCs）诱导成神经细胞并鉴定其神经生物学特性,并探究其对损伤的神经细胞的作用机制。方法1.评价三种诱导培养基的诱导效果:分别采用DMEM/F12（DMEM/F12组）、高糖DMEM（DMEM组）、Neurobasal-A（NA组）诱导培养基和胎盘间充质专用无血清培养基（PMSC组）培
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目的利用神经细胞诱导培养基将胎盘间充质干细胞（placental mesenchymal stem cells,PMSCs）诱导成神经细胞并鉴定其神经生物学特性,并探究其对损伤的神经细胞的作用机制。方法1.评价三种诱导培养基的诱导效果:分别采用DMEM/F12（DMEM/F12组）、高糖DMEM（DMEM组）、Neurobasal-A（NA组）诱导培养基和胎盘间充质专用无血清培养基（PMSC组）培养人类PMSCs,比较各组诱导后形成的神经球增殖能力;利用免疫荧光染色鉴定诱导成的神经球的巢蛋白（nestin）、生长相关蛋白43（growth-associated protein 43,GAP43）表达;Western Blot检测细胞神经丝蛋白（neurofilament protein,NF）表达量;2.利用氧化应激模型评价不同方法诱导成的神经细胞（PMSCs induced neuronal cells,PMSCs-iNCs）的治疗效果:收集不同方法诱导成的PMSCs-iNCs,置于高糖DMEM+5%FBS的培养基中继续培养24 h后,收集各组细胞培养上清作为条件培养基（conditioned medium,CM）。利用条件培养基培养经H2O2处理2 h的小鼠海马神经元细胞系HT22细胞,利用免疫荧光染色检测凋亡相关蛋白Caspase 3的表达评价其效果;3.提取小鼠海马原代神经干细胞,利用免疫荧光染色鉴定其神经干细胞相关蛋白nestin、神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase,NSE）、NF及GAP43;建立神经干细胞氧糖剥夺（oxygen and glucose deprivation,OGD）模型,用PMSCs-iNCs的条件培养基对损伤的神经干细胞进行培养治疗（OGD+CM组）,利用光镜观察受损神经细胞的形态的恢复情况;利用EDU染色评价细胞增殖能力变化;利用免疫荧光染色检测细胞凋亡相关蛋白Caspase 3的表达;Western Blot检测细胞抗氧化相关蛋白超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）的表达量;利用流式细胞仪检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）的水平。结果1.采用3种不同诱导培养基将PMSCs培养24 h后,各组均有神经球出现并且能够不断增殖,PMSCs-iNCs的nestin和GAP43表达为阳性,NF在诱导形成的神经样细胞中的表达水平明显高于未诱导的PMSCs组的表达水平（P<0.05）;2.分别采用3种由不同诱导方法获得的PMSCs-iNCs条件培养基对氧化损伤的HT22细胞进行培养后,阳性表达caspase-3的HT22细胞数目明显减少（P<0.05）;3.用PMSCs-iNCs的条件培养基对OGD损伤的小鼠海马神经干细胞进行培养后,结果显示:OGD+CM组阳性表达Ed U的细胞与OGD组相比明显增加（P<0.05）;OGD+CM组阳性表达caspase-3的细胞明显低于OGD组（P<0.05）;OGD+CM组SOD相对表达量高于OGD组（P<0.05）;OGD+CM组细胞内ROS水平低于OGD组（P<0.05）。结论我们采用的3种诱导培养基均可以有效地将PMSCs诱导成神经细胞,表达神经细胞相关蛋白,具有神经细胞的生物学特性;PMSCs-iNCs对神经损伤具有保护和促进恢复作用;PMSCs-iNCs对氧化损伤的神经细胞的保护作用与其抗氧化功能相关。
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