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本试验以中国野生华东葡萄（Vitis pseudoreticulata）株系‘白河-35-1’基因组DNA为模板，根据欧洲葡萄VvPR10基因序列设计引物，采用重叠延伸PCR扩增获得VpPR10.4、VpPR10.6、VpPR10.7、VpPR10.9基因序列，并构建相应的重组原核表达载体，诱导目的蛋白表达与纯化；进一步分析目的纯化蛋白VpPR10.4、VpPR10.6、VpPR10.7、VpPR10.9的核酸酶活性，为华东葡萄病程相关蛋白VpPR10.4、VpPR10.6、VpPR10.7、VpPR10.9抗病机理提供理论依据，取得的主要研究结果如下：1.通过重叠延伸PCR扩增得到VpPR10.4、VpPR10.6、VpPR10.7、VpPR10.9基因序列。氨基酸序列分析表明，VpPR10.4和VpPR10.7氨基酸序列具有PR10家族保守的P-loop和Bet v1结构域；而VpPR10.6氨基酸序列不含有Bet v1保守结构域；VpPR10.9氨基酸序列不含有P-loop和Bet v1保守结构域。VpPR10.4和VpPR10.7氨基酸序列中含有核酸酶活性的特征性氨基酸位点，分别为：E102、E149和Y151；而在VpPR10.9氨基酸序列中，E102被D102取代，在VpPR10.6氨基酸序列中，E149、Y151分别由Q149、H151取代。采用MEGA4.0软件对VpPR10.4、VpPR10.6、VpPR107、VpPR10.9氨基酸序列进行同源性及系统进化关系分析，结果显示：VpPR10.4与VpPR10.6亲缘关系较近，VpPR10.7与VpPR10.9亲缘关系较近。2.构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-VpPR10s，转化原核表达菌株E.coli.BL21（DE3），通过优化目的蛋白表达条件，确定pGEX-4T-1-VpPR10.7在28℃、0.1mM IPTG诱导表达4h，可获得大小为43KDa左右的可溶性重组蛋白。收集可溶性蛋白VpPR10.7，用GST纯化树脂纯化目的融合蛋白；对于在不同条件下诱导均以包涵体形式存在的VpPR10.4、VpPR10.6、VpPR10.9蛋白，在28℃、0.1mM IPTG诱导表达4h后，菌体经细菌裂解液裂解，再用包涵体溶解液溶解，随后进行梯度透析，通过真空冷冻干燥，GST纯化树脂纯化得到浓度较高的目的蛋白。3.纯化目的蛋白体外核酸酶活性分析。将8μg的VpPR10.4、VpPR10.6、VpPR10.7、VpPR10.9蛋白分别与中国野生华东葡萄株系‘白河-35-1’叶片总RNA和gDNA进行核酸酶活性试验，用1%的琼脂糖凝胶电泳检测。结果表明，VpPR10.4、VpPR10.7蛋白具有RNase和DNase活性；而VpPR10.6、VpPR10.9蛋白则无RNase和DNase活性，结果进一步表明VpPR10s蛋白的核酸酶活性与其保守结构域及保守氨基酸位点有关。