活性硫物种(RSS)是在生物体系中一类含巯基的化合物，参与多种生理及病理过程。谷胱甘肽(GSH)是一种重要的活性硫。它作为一种重要的抗氧化剂，为细胞提供有效的抗氧化防御功能。多硫化氢(H2Sn，n＞1)在调节生理过程方面，如细胞信号传导和维持氧化还原稳态有着重要作用。此外，生物体内的酸碱平衡，在许多生理和病理过程起着重要的调节作用，一些疾病与细胞质或细胞器中pH值异常存在联系。由于荧光检测具有操作简单、灵敏度高和无创性等优点，荧光探针已经成为检测这些物种重要的有效工具。本文设计合成了区分检测活性硫荧光探针及pH荧光探针，具体内容如下:
　　(1)针对区分检测活性硫的难题，开发了一种双通道同时区分检测GSH和H2Sn的荧光探针DCM-COU。该探针通过酯化反应将4-位苯硒醚取代的二乙氨基香豆素与DCM染料构建在一起，以苯硒醚部分为识别位点1，酯键部分为识别位点2。探针与GSH反应时，由于-SH的强亲核性，苯硒醚部分离去，发射出绿色荧光信号;与H2Sn反应时，首先发生亲核取代反应使苯硒醚部离去，然后再进攻反应位点2，释放出DCM染料，产生红色荧光信号。该探针在应用的过程中表现出了良好的选择性、一定的抗干扰能力，并且实现了从不同通道对活细胞中GSH和H2Sn进行荧光成像。
　　(2)探针DCM-COU在检测的过程中需要采用双波长激发以获得不同的荧光信号。相比双波长激发，单波长激发操作更简单、准确度更高。采用与香豆素吸收光谱重叠度较大的荧光染料DCI替代DCM染料，构建了一种单波长激发区分检测GSH和H2Sn的探针DCI-COU。该探针表现出了高的灵敏度、强抗干扰性、高选择性，也被成功应用于活细胞中GSH和H2S。的荧光区分检测。
　　(3)以罗丹明B(RhB)和HBT染料为荧光母体，开发了一种基于荧光共振能量转移(FRET)和激发态分子内质子转移(ESIPT)多重响应机制的pH荧光探针HBT-RhB。酸性环境中，FRET和ESIPT过程同时发生，探针主要发射RhB的红色荧光(593nm)。中性环境中，FRET过程受到抑制，ESPT过程发生，主要发射HBT的酮式荧光(540nm)。碱性环境，FRET和ESIPT过程均被抑制，主要发射出HBT的去质子化荧光(470nm)。通常pH荧光探针为酸性或碱性探针，该探针在酸碱环境中表现出不同的响应机制，具有较宽的pH适用范围，是一种构建pH荧光探针的新方法。