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目的通过对SPF级雄性大鼠进行生理盐水灌胃制备经典水负荷模型,观察五苓方散剂对其利尿作用及对该作用与水通道蛋白1(AQP-1)的相关性进行初步探讨。方法将40只雄性大鼠随机分为5组,每组8只:正常组(NG)、五苓散低剂量组(WLS-L)、五苓散等效剂量组(WLS-M)、五苓散高剂量组(WLS-H)与呋塞米组(Fur-g),正常组给予等体积生理盐水(8.0ml)灌胃,五苓散各剂量从低到高组依次灌胃浓度为0.13g/Kg、0.26g/Kg、0.52g/Kg,确定药量后并稀释于8ml生理盐水进行灌胃,阳性对照组给予8ml(浓度1.0m g/ml)的呋塞米灌胃,用代谢笼装置测定各组大鼠每个时间点(1h、2h、4h、6h、8h、24h)尿液量,检测各组大鼠心钠素(ANP)水平,实验结束后摘取大鼠肾脏并对其应用免疫组化技术、RT-PCR、Western Blot对大鼠肾脏水通道蛋白1蛋白及mRNA的表达情况进行检测与分析。结果1、通过对大鼠24h总尿液量的测量,发现与NG组表较,WLS-L、W LS-H组24h总尿量变化无统计学意义,而WLS-M组及Fur-g组24h尿量变化存在明显差异(P<0.05);与Fur-g组比较,WLS-M组24h尿量变化无差异性(P>0.05)。2、通过对各组大鼠在给药后相应时间点(1h、2h、4h、6h、8h)尿量测量分析,各实验组(WLS-L组、WLS-M组、WLS-H组、Fur-g组)随时间变化各时间点尿量逐渐增加,但各组增加水平幅度不一致。与NG组比较,WLS-M组在大鼠给药后2h、4h、6h各时间点尿量存在显著性差异(P<0.05),Fur-g组在给药后1h、2h、4h各时间点有统计学意义(P<0.05),而WLS-L、WLS-H组在给药后1h、2h、4h、6h、8h等各时间点尿量均无统计学意义。3、通过应用ELISA法检测大鼠血浆ANP水平发现,与NG比较,WLS-M、WLS-H组大鼠肾脏AQP-1浓度明显上升,阳性对照组Fur-g组大鼠A QP-1水平上升,有统计学意义(P<0.05),与阳性对照组Fur-g比较,W LS-M、WLS-H大鼠肾脏AQP-1浓度无显著差异性。4、通过采用ELISA法测量大鼠肾脏AQP-1浓度发现与NG比较,与NG比较,WLS-L、WLS-H组大鼠肾脏AQP-1浓度无统计学意义(P>0.05),WLS-M、Fur-g组大鼠AQP-1浓度降低,存在明显差异性,有统计学意义(P<0.05),与Fur-g比较,WLS-M组大鼠肾脏AQP-1浓度有无显著差异性。5、通过应用免疫组化、RT-PCR、Western Blot技术对大鼠肾脏AQP-1蛋白、mRNA检测,表明AQP-1主要分布在肾脏近端小管上皮细胞膜上,经图像软件分析各区域密度灰值可知,与NG组比较,WLS-M组AQP-1蛋白及mRNA表达均下调,具有统计学意义(P<0.05)。结论1.五苓方散剂对经典水负荷模型大鼠具有利尿作用,且五苓散等效剂量组利尿效果最显著。2.五苓方散剂对水负荷大鼠的利尿作用可能与大鼠血浆ANP水平变化存在一定相关性。3.五苓方散剂对水负荷大鼠利尿作用可能与肾脏AQP-1有关,其利尿作用可能通过下调肾脏AQP-1mRNA表达水平实现的。