BMSCs移植联合应用IN-1抗体修复大鼠急性脊髓损伤的实验研究

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目的:研究骨髓间充质干细胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs)移植联合髓鞘生长阻逆蛋白抗体IN-1(monoclonal antibody IN-1)对大鼠皮质脊髓束横断后脊髓损伤修复的影响及意义。方法:采用密度梯度离心与贴壁筛选法相结合制备大鼠骨髓间充质干细胞,选用清洁级健康Sprague-Dawley(SD)大鼠180只,体重250-300g,雌雄不限,随机分成手术对照组(n=60)、BMSCs移植组(n=60)、BMSCs移植联合IN-1组(n=60),每组又按照手术后时间随机平均分为1d、4d、7d、14d、21d和28d六个小组,每个小组10只。所有大鼠首先行蛛网膜下腔置管,然后在相当于T8椎板水平用做好标记的显微剪刀剪断脊髓的背侧2/3,建立大鼠皮质脊髓束横断损伤模型。其中手术对照组通过置管每次注入生理盐水5μl,而BMSCs组每次注入骨髓间充质干细胞悬液(5μl),IN-1和BMSCs联合作用组,每次注入IN-12.5μl和骨髓间充质干细胞悬液2.5μl,每天分为早、中、晚三次注射,最长持续1 w。每组中取5只,在手术前及手术后1d、1w、2w、3w及4w,采用BBB (Basso, Beattle, Bresnahan)评分评价运动功能,然后取出脊髓组织检测胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillry acidic protein, GFAP)表达的变化。其余对照组及BMSCs移植组、BMSCs移植联合IN-1组动物于损伤后1d、4d、7d、14d、21d和28d六个时间点取出伤段脊髓,分别行RT-PCR(reverse transcription -polymerase chain reaction)检测GAP-43基因表达的变化,所得数据采用单因素方差分析进行统计学处理,P<0.05结果有统计学差异。结果:1、脊髓损伤后GAP-43 mRNA的表达呈现先升高后降低的趋势,其表达的高峰分别在脊髓损伤后7d、14d、21d时间点;2、移植BMSCs后三者mRNA的表达上调,联合应用IN-1后效果更加明显,各组相比有统计学意义(P<0.05)。3、脊髓损伤后双后肢瘫痪,BBB评分,2w、3w和4w点BMSCs移植组、BMSCs移植联合IN-1组移植组明显高于损伤对照组,有显著统计学差异(P<0.05);BMSCs移植联合IN-1组高于BMSCs移植组,有统计学差异(P<0.05)。4、GFAP免疫组化结果显示,BMSCs移植联合IN-1组平均灰度值明显小于其他两组,有显著统计学差异(P<0.05)。结论:(1)脊髓损伤后GFAP表达增加,而IN-1、BMSCs可以抑制GFAP表达,从而抑制胶质细胞的反应性增生。(2)IN-1、BMSCs可能通过上调GAP-43 mRNA的表达,从而对脊髓损伤后轴突再生起一定的促进作用。(3)BMSCs移植联合IN-1可促进损伤的脊髓神经的存活和再生,并互相协同作用,较单一应用BMSCs能更好的促进脊髓损伤修复和大鼠后肢功能恢复。
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