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利用IPTG诱导大肠杆菌表达GST-BovIFN-γ融合蛋白，经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后，切取融合蛋白条带制成冻干粉作为免疫原，免疫Balb／c小鼠，取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0进行细胞融合，研制抗BovIFN-γ的单克隆抗体(McAb)。以表达GST-BovIFN-γ融合蛋白的重组大肠杆菌超声波裂解上清作为检测抗原，表达空载体GST蛋白的大肠杆菌超声波裂解上清作为对照检测抗原，用间接ELISA方法进行检测，筛选只与表达GST-BovIFN-γ融合蛋白的重组菌裂解液作为包被抗原反应而不与表达GST的非重组菌裂解液作为包被抗原反应的杂交瘤细胞上清，然后利用其它检测方法进一步鉴定单抗的特异性。结果筛选出2 株分泌抗rBovIFN-γ抗体的阳性杂交瘤细胞株，命名为BovIFN-γ-4A3与BovIFN-γ-4G5。将两株杂交瘤细胞株分别采取有限稀释法连续亚克隆多次，直到检测100％细胞阳性孔，然后将此细胞株进行冻存及制备腹水。 间接ELISA分析结果表明，单抗BovIFN-γ-4A3效价较高，腹水效价可达到(?)1.3×10~7，单抗BovIFN-γ-4G5效价1：25600。Western-blot试验结果证明，单抗BovIFN-γ-4A3与BovIFN-γ-4G5均能与IPTG诱导的重组菌裂解物反应，在融合蛋白GST-BovIFN-γ呈现明显条带，而不能与大肠杆菌表达的重组鸡IFN-γ反应，间接免疫荧光试验(IFA)结果发现，单抗BovIFN-γ-4A3与感染重组杆状病霉Bacmid-BovIFN-γ的Sf9细胞反应，出现特异性亮绿色荧光；中和试验结果证明，单抗BovIFN-γ-4A3对rBovIFN-γ的抗病毒活性有一定程度的中和作用。用捕获ELISA进行单抗的亚类鉴定，证明单抗BovIFN-γ-4A3 Ig亚类为IgG2b，单抗BovIFN-γ-4G5 Ig亚类为IgM。这些结果表明，2株单抗均是针对牛的IFN-γ的特异性单克隆抗体，而不与其他抗原(如GST，重组鸡IFN-γ)反应。 为使获得的2株单抗得到更好的应用，将单抗BovIFN-γ-4A3用过碘酸钠氧化法标记辣根过氧化物酶(HRP)，作为酶标抗体，单抗BovIFN-γ-4G5作为固相包被抗体，重组牛IFN-γ(GST-BovIFN-γ)作为检测抗原，建立一种夹心ELISA方法检测rBovIFN-γ。实验结果表明，此法特异性及其敏感性良好，可以进一步应用于rBovIFN-γ的检测。