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目的:肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是我国常见恶性肿瘤之一,死亡率仅次于胃癌和食管癌,5年生存率不足5%。流行病学和实验研究均表明慢性病毒性肝炎与原发性肝癌的发生有着密切的关系,其中以乙型肝炎与肝癌关系最为紧密。微小RNA(microRNA,miRNA)是一种内源性、非编码的小分子RNA,长度一般约22个核苷酸,通过介导基因表达的转录后调节,影响细胞的生长、分化、凋亡、周期和免疫反应等特性,在生物的生长发育和疾病发生发展中发挥重要作用。最近研究表明,多种病毒家族也能编码miRNA,在病毒与宿主的相互作用中,扮演重要角色。目前尚无关于HBV编码的miRNA的报道,本实验室的前期工作中,在HBV 阳性的肝癌组织的Solexa测序中首次发现了 HBV编码的miRNA,并命名为BVmiR-369780。本实验拟研究BVmiR-369780对HBV增殖的作用以及对肝癌细胞恶性行为的影响,并确定BVmiR-369780发挥作用的具体机制。方法:为验证前期工作的深度测序结果的正确性,首先应用qRT-PCR方法检测BVmiR-369780在HBV阳性血清中以及稳定表达HBV的HepG2 2.2.15细胞中的表达水平。随后在HuH-7细胞中,共转染BVmiR-369780和HBV-1.3拷贝,在HepG2 2.2.15细胞中分别过表达和封闭BVmiR-369780,利用Real-time PCR方法和ELISA方法检测BVmiRNA-369780对HBV复制和抗原产生的影响。同时在两种人肝癌细胞系SMMC-7721和HepG2细胞中,过表达BVmiR-369780,并利用MTT实验、集落形成实验和Transwell迁移实验检测细胞生长和迁移的变化。之后利用生物信息学方法筛选BVmiR-369780的候选靶基因,并利用荧光报告载体实验验证BVmiR-369780对其靶基因的直接调控作用。并通过qRT-PCR和Western blot技术检测肝癌细胞中过表达BVmiR-369780以后,内源性靶基因的mRNA水平和蛋白水平的差异表达。最后分别过表达和敲降靶基因后,用MTT、集落形成实验和Transwell迁移实验进一步验证了靶基因在两种人肝癌细胞系SMMC-7721和HepG2细胞中的功能。结果:BVmiR-369780在HBV 阳性血清和HepG2 2.2.15肝癌细胞中表达明显升高。在转染HBV-1.3拷贝的HuH-7细胞和HepG2 2.2.15细胞中过表达BVmiR-369780后,细胞上清中HBsAg和HBeAg水平以及HBV DNA的水平明显升高,而在HepG2 2.2.15降低其表达以后,细胞培养上清中HBsAg和HBeAg水平及HBV DNA的水平明显降低。并且BVmiR-369780可以明显增加肝癌细胞的增殖、集落形成和迁移能力。生物信息学分析结果发现PDGFRL的3’非翻译区包含BVmiR-369780的潜在结合位点,再结合已报道PDGFRL的功能,所以选定其为BVmiR-369780的候选靶基因。荧光报告载体实验证实,BVmiR-369780能够通过作用于靶基因3’非翻译区的特定位点,在转录后水平对其进行负性调节。在过表达BVmiR-369780的肝癌细胞中,靶基因PDGFRL的mRNA和蛋白表达水平与对照组相比都明显降低。进一步说明PDGFRL是BVmiR-369780的靶基因。功能学实验结果显示,在肝癌细胞中过表达PDGFRL后,肝癌细胞的增殖、集落形成和迁移能力下降,相反,敲降PDGFRL后,细胞的增殖、迁移能力升高。结论:我们首次发现并验证HBV编码的miRNA—BVmiR-369780。BVmiR-369780 能促进 HBsAg 和 HBeAg 的产生以及 HBV 的复制。BVmiR-369780 可能通过下调PDGFRL的表达促进细胞增殖和迁移,起到癌基因的作用。对HBV编码的miRNA在HBV生命活动周期和肝癌细胞中的作用机制的研究,将为我们探索HBV感染与肝细胞癌的关系提供新的视野。并可能为抗病毒治疗和HBV相关的肝癌的治疗提供新的靶点。