HSulf-1在黑素瘤中的表达及抑制肿瘤细胞迁移的作用

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第一部分HSulf-1在人恶性黑素瘤及正常组织组合芯片中的表达目的:观察黑素瘤组织、色素痣组织中HSulf-1的表达。方法:运用组合组织芯片,在色素痣(N=16)、原发性黑素瘤(N=30)及转移性黑素瘤(N=24)中,应用免疫荧光方法检测HSulf-1在各组织中的表达,对蛋白表达进行定量分析。结果:HSulf-1在原发性黑素瘤中的表达高于转移性黑素瘤(p<0.05), HSulf-1在色素痣与原发性黑素瘤中、色素痣与转移性黑素瘤中表达的差异无统计学意义p>0.05)。结论:HSulf-1可能抑制黑素瘤由原发灶转移至其他器官的过程。第二部分HSulf-1在人原代黑素细胞和恶性黑素瘤细胞系中的表达目的:观察人原代黑素细胞株HEMa和恶性黑素瘤细胞株A375、Malme-3M、 SK-MEL-2、SK-MEL-5、SK-MEL-28、M14、MV3中HSulf-1的表达及其意义。方法:以人原代黑素细胞株HEMa作为对照,应用Real-time PCR和Western blot方法检测人恶性黑素瘤细胞系中HSulf-1蛋白和mRNA的表达。结果:在HSulf-1mRNA和蛋白表达水平上,正常黑色素细胞株、低转移性恶性黑素瘤细胞株高于转移性恶性黑素瘤细胞株。结论:HSulf-1在转移性黑素瘤的发生发展过程中可能发挥了抑制转移作用。第三部分在黑素瘤细胞株中过表达HSulf-1目的:为了研究HSulf-1在黑素瘤发生发展过程中所起的作用,在黑素瘤细胞株中过表达:HSulf-1。方法:将HSulf-1基因稳定表达载体pcDNA3.1/Myc-His(-)-HSulf-1质粒用脂质体转染法导入HSulf-1低表达的黑素瘤细胞MV3,用Western blot方法检测转染后人恶性黑素瘤细胞株MV3中HSulf-1在蛋白水平表达的改变,Real-time PCR方法检测人恶性黑素瘤细胞株MV3中HSulf-1在mRNA水平HSulf-1表达的改变。结果:同对照相比,转染HSulf-1基因稳定表达载体的黑素瘤细胞株在HSulf-1蛋白、mRNA水平升高。结论:黑素瘤细胞株成功过表达HSulf-1。第四部分HSulf-1对恶性黑素瘤细胞生物学特性的影响目的:研究HSulf-1在黑素瘤发生发展过程中对肿瘤细胞增殖及迁移能力的影响。方法:在HSulf-1过表达的黑素瘤细胞株,用Western blot方法检测HSulf-1在恶性黑色素瘤发生发展过程中对肿瘤细胞HGF信号通路的作用;用MTT法检测各组细胞生长与增殖能力的差异;用细胞迁移实验检测各组细胞迁移能力的差异。结果:在HSulf-1稳定表达的恶性黑素瘤细胞株MV3中,ERK的磷酸化激活效应减弱,但可能不是由HGF信号通路介导;过表达HSulf-1的恶性黑素瘤细胞株MV3的迁移能力低于对照组;且在该细胞株中,HSulf-1对细胞的增殖能力的影响与对照组相比无明显差异。结论:推测HSulf-1可能参与降低恶性黑素瘤细胞株的迁移能力,从而抑制肿瘤的转移。
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