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新城疫(Newcastle disease)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起禽类的一种高发病率和死亡率的烈性传染病。目前我国山东、浙江和广东等地相继报道该疾病在鸭群中流行,已给养鸭业带来较大的经济损失。本文对鸭源NDV广西分离株GX19/2011进行生物学特性的研究,结果表明：广西分离株GX19/2011的ELD50为10-9.48/0.1mL、MDT为51.4h、ICPI为1.80、IVPI为2.82,推测该分离株GX19/2011为NDV强毒。用该毒株分别对35日龄和50日龄的鸭进行人工感染,35日龄、50日龄的鸭的发病率都为100%,死亡率分别为100%,70%。对鸭源NDV广西分离株GX19/2011的全基因进行测序并进行分析,该毒株全长为15192bp,与F48E8,GD09-2,JS/1/02/Du,JS/1/97/Ch参考毒株的亲缘关系较近,F基因核苷酸同源性为98.9%-99.1%,氨基酸的同源性为99.6%-99.8%。但与Lasota的同源性相对较低,F基因核苷酸的为88.1%,氨基酸为91.9%。进化树分析表明,该分离株属于基因Ⅸ。该分离株F蛋白裂解位点的氨基酸序列为112R-R-Q-R-R-F117,符合强毒株的裂解位点的氨基酸组合。根据GenBank中鸭源NDV的F基因和鸭圆环病毒(Duck circovirus, DuCV)的V1/rep基因的保守序列各设计一对特异性引物,并优化扩增条件,建立了同时检测鸭NDV和DuCV的二重PCR方法。该方法特异性好,对番鸭细小病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、鸭源小鹅瘟病毒、鸭H9亚型流感病毒、鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、禽多杀性巴氏杆菌等病原核酸无特异性扩增。该方法的敏感性高,对鸭NDV的核酸最小检测量为40龟,对DuCV的为20fg。根据GenBank公布的鸭源NDV、鸭瘟病毒(Duck Plague virus, DPV)和DuCV基因序列,设计了3对特异性引物并建立了鉴别诊断鸭源NDV、DPV和DuCV的多重PCR检测方法。该方法特异性好,对番鸭呼肠孤病毒、鸭源GPV、H5亚型流感、鸭源H9亚型流感病毒、鸭疫里默氏杆菌、E.coli、禽多杀性巴氏杆菌等病原核酸无特异性扩增；敏感性高,鸭源NDV、 DPV和DuCV的核酸最低检出限分别10pg、4pg、1.5pgo对180份病料进行检测,结果DuCV阳性10份,阳性率为5.6%；鸭源NDV阳性1份,阳性率为0.56%。结果表明,建立的多重PCR方法可以应用于鸭源NDV、DPV和DuCV的临床检测和流行病学调查。根据鸭源NDV和DuCV保守基因序列,设计了2对针对鸭源NDV和DuCV的特异性引物和2条不同荧光基团标记的TaqMan探针,建立了鸭源NDV和DuCV的二重实时荧光定量PCR检测方法。该方法特异性性好,对番鸭细小病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、鸭源小鹅瘟病毒、鸭H9亚型流感病毒、鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、禽多杀性巴氏杆菌等病原核酸无特异性扩增；敏感性高,对鸭源NDV的最小检测量是160拷贝,DuCV的为140拷贝。应用该方法对保存118份临床病料核酸进行检测,结果检出鸭副粘病毒和鸭圆环病毒阳性感染率分别为0.85%和8.47%,无混合感染。试验结果表明,建立的三种方法都具有快速、特异、敏感等优点,适用于兽医临床和实验室检测。根据鸭源NDVF基因和DuCV Cap基因开放阅读框序列,设计了2对特异性引物,PCR扩增出鸭源NDV的F基因和DuCV的Cap基因,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1,成功构建重组融合表达质粒pcDNA3.1-F-Cap。经酶切和测序鉴定正确后,将重组质粒pcDNA3.1-F-Cap转染Vero细胞,采用间接免疫荧光检测到目的基因的体外表达。将pcDNA3.1-F-Cap作为DNA疫苗对2周龄的SPF雏鸭以胸部肌肉多点注射的方式进行免疫,根据接种剂量的不同,分3个实验组,每组10只,即接种剂量分别为100μg/只、200μg/只和300μg/只,同时设载体质粒空白组和灭活疫苗组,一免后两周进行一次加强免疫。每次免疫前和攻毒前各采一次血,ELASA检测抗体水平。试验结果显示：各DNA疫苗免疫组的NDV抗体和DuCV抗体水平明显高于载体空白对照组,差异显著(P<0.05)；二免后不同DNA剂量组间的抗体水平随着免疫剂量的增大而增加,差异显著(P<0.05)；二次免疫后,各疫苗试验组的抗体水平明显高于一次免疫(P<0.05),说明加强免疫有利于抗体水平的提高。于第二次免疫后2周,使用分离株GX2011/19以滴鼻的方式每只SPR鸭接种0.5m110648ELD50剂量进行攻毒试验。试验结果显示,免疫灭活疫苗组的鸭只保护率为100%,接种pcDNA3.1-F-Cap剂量为300μg/只免疫组的保护率为40%,高于pcDNA3.1-F-Cap为200μg/只组(30%)、pcDNA3.1-F-Cap为100μ g/只组(10%)和载体空白组(0%)。试验结果表明,构建的DNA疫苗对新城疫病毒的强毒攻击具有一定的抵抗了,此疫苗的保护率随着免疫剂量的增大而有所增加。