【摘 要】
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该文研究了用重组肉碱脱水酶(Cai-B)工程菌休止细胞为酶源生物转化反巴豆甜菜碱为L-肉碱的菌体生长培养条件和休止细胞生物转化培养条件以及产物L-肉碱的分离提取.工程菌生长
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该文研究了用重组肉碱脱水酶(Cai-B)工程菌休止细胞为酶源生物转化反巴豆甜菜碱为L-肉碱的菌体生长培养条件和休止细胞生物转化培养条件以及产物L-肉碱的分离提取.工程菌生长阶段的培养条件为:培养基初始pH7.5,培养基含2g/L的肉碱,2g/L的富马酸盐,12.6g/L的甘油,5％的接种量,37℃培养,装液量为250ml摇瓶装100ml,4小时后加1mM IPTG诱导Cai-B表达,诱导后继续培养4小时.基于摇瓶培养条件,用15L发酵罐培养,工程菌生物量达到A<,600>为18,Cai-B的酶活达到31U/g细胞.休止细胞生物转化阶段培养条件为:pH值为7.5,37℃转化,底物反巴豆甜菜碱浓度为10g/L,细胞浓度为4g/L,转化3小时,产量为2.9g/L,转化率为25.8％.酶转化的清液在60℃,pH为5.0条件下加量1.0％活性炭脱色15min,加入过量的亚硫酸盐除去没反应的反巴豆甜菜碱,然后上大孔阳离子交换树脂HD-8,上样pH为5.0,用1M的HCl洗脱,洗脱液收集后真空蒸发烘干得粗品,回收率为82％,纯度达到93.7％(干物质).
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