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极光激酶A(Aurora kinase A,AURKA)是细胞周期有丝分裂调节蛋白激酶之一,参与调控生殖细胞的发生和成熟。研究表明AURKA是雄激素受体(Androgen receptor,AR)的靶基因,睾酮(Testosterone,T)和双氢睾酮(Dihydrotestosterone,DHT)与胞内AR结合后促进精子成熟。因此,探究AURKA与雄激素的作用机制对雄性动物生殖及相关疾病的研究有重要意义,但其具体作用及机制尚不完全清楚。本研究采集8周龄昆明雄性小鼠(Mus musculus)下丘脑、垂体和睾丸组织,通过半定量PCR(Semi-quantitative interpretation PCR,RT-PCR)、实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)、免疫印迹(Western blotting,WB)、苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,H.E.)和免疫组化学染色(Immunohistochemistry,IHC),探究AURKA在雄性小鼠性腺轴的表达规律及定位。设计小鼠AURKA-siRNA干扰序列和pIRES2-EGFP-AURKA过表达载体,转染原代成年小鼠睾丸支持细胞,利用细胞免疫荧光(Immunofluorescence,IF)检测AURKA在成年小鼠支持细胞中的表达定位;qRT-PCR和WB检测转染后支持细胞中AURKA和雄激素合成关键酶类固醇激素合成急性调节蛋白(Steroidogenic acute regulatory protein,StAR),细胞色素P450胆固醇侧链剪切酶(Cholesterolside-chain cleavage cytochrome P450 enzyme,CYP11A1)、17α-羟化酶(17α-hydroxylase,CYP17A1)、3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)、5α-还原酶1(5α-reductase type 1,SRD5A1)基因和蛋白表达变化;酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析AURKA-siRNA和pIRES2-EGFP-AURKA双向干扰睾丸支持细胞中AURKA表达后对T和DHT含量的影响。结果如下:1、成年雄性小鼠性腺轴器官组织中AURKA基因和蛋白均有表达,睾丸组织中AURKA表达量极显著高于下丘脑和垂体组织(P<0.01),且睾丸支持细胞及精子中AURKA蛋白阳性反应最强;2、成年小鼠支持细胞中AURKA蛋白在细胞胞浆和细胞核中均有表达;3、AURKA-siRNA干扰成年雄性小鼠支持细胞24 h后,AURKA基因和蛋白的表达显著降低(P<0.05),雄激素合成关键酶基因和蛋白表达量显著上调,T和DHT的含量也显著上调。4、pIRES2-EGFP-AURKA瞬时转染成年雄性小鼠支持细胞72 h和96 h后,AURKA基因和蛋白表达量极显著升高(P<0.01),雄激素合成途径中各关键酶基因和蛋白表达量减少,T和DHT含量也显著降低。说明AURKA负反馈调节睾酮合成途径中各个关键酶的表达促进T和DHT合成。结果表明:AURKA负反馈调控T和DHT合成途径中关键酶StAR、CYP11A1、CYP17A1、3β-HSD、SRD5A1的表达以促进T和DHT合成,这为雄性动物生殖过程中AURKA功能研究提供参考依据。