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本实验在总结前人研究基础上,针对黑龙江省地区发生的龙胆斑枯病病原菌进行了系统的研究鉴定,为专属性地防治龙胆草药用植物的病害准确鉴定出病原物,同时也为改进化学农药防治和中药防治等措施奠定了基础,进而提高龙胆单位面积产量。此研究过程中利用传统形态学鉴定、GC-MS气质联用色谱法检测菌株全细胞脂肪酸聚类分析技术、ISSR分子生物学标记技术三大方法进系统地鉴定了来自黑龙江省北安市赵光农场、七台河北方中草药研究所、佳木斯市莲江口农场、黑龙江中医药大学药用植物园四个粗糙龙胆种植地区分离纯化得到的44个龙胆斑枯病病原菌株。 首先,对上述四个产地的龙胆斑枯病叶片进行五点法采样,并对整体病害症状进行观察记录;采用病叶组织分离法结合分生孢子悬液纯化法进行分离纯化菌株,对黑龙江省北安、七台河、佳木斯、黑龙江中医药大学药用植物园四个不同地区的龙胆斑枯病病叶进行病原体分离纯化,分别得到15、9、12、8个菌株,总计44株病原菌。传统形态学鉴定在宏观方面主要观察病叶的病斑形状、病斑直径大小、病斑颜色、发斑部位、分生孢子器着生位置;微观方面主要观察分生孢子器和产孢细胞的形态、孢子形态、孢子长度大小、隔膜数。参照国内外关于龙胆斑枯病病原菌研究鉴定情况结合所分离的病原菌形态学观察初步得出结论为:所分离纯化的44个菌株,形态学无显著性差异,依据真菌分类检索表均归为同一个种属,即为半知菌亚门球壳孢目壳针孢属真菌中的小孢壳针孢即为Septoria microspora Speg。 其次,由于龙胆斑枯病病原菌属于球壳孢目真菌范畴,传统形态学在此分类鉴定研究上目前已存在很大不足,无法确定龙胆斑枯病病原菌是否存在变异。故利用GC-MS气质联用色谱法检测菌株全细胞脂肪酸聚类分析技术进一步鉴定。通过NaOH-甲醇法进行全细胞脂肪酸甲酯化处理菌株样品,GC-MS进行检测,确定谱峰,进而利用百分面积归一化法计算相对峰面积对气相色谱图中多个谱峰进行聚类分析,将所分离得到的44个菌株分为三类,结合前期传统形态学