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目的：建立肺炎衣原体(Chlamdia pneumoniae，C.pn)体外感染大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)模型；观察C.pn感染对VSMC迁移能力的影响以及Toll样受体2(Toll Like Receptor2，TLR2)在C.pn感染促进VSMC迁移中的作用，探讨其相关分子机制。
方法：⑴取清洁级SD大鼠主动脉中层，用组织贴块法对VSMC进行原代培养。倒置显微镜下观察细胞形态，用特异性小鼠抗人单克隆a-平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin，a-SM actin)抗体对VSMC进行鉴定；⑵C.pn AR-39株在人喉癌细胞系(Human Epidermoid Carcinoma-2 cell，HEp-2细胞)内增殖培养后感染VSMC；⑶确定C.pn成功感染VSMC：C.pn感染72 h后，聚合酶链反应(polymerase chainreaction，PCR)检测C.pn特异性DNA片段；卢戈氏碘染色和吖啶橙(acridineorange，AO)染色，观察VSMC感染状态和C.pn包涵体的形态特点；利用小鼠抗C.pn单克隆抗体确定C.pn成功感染VSMC；⑷透射电镜下观察感染24h、48 h和72h后，VSMC内C.pn的增殖情况和细胞的超微结构变化；⑸Wound-healing实验和Transwell实验观察C.pn感染24h后的VSMC迁移能力的变化；⑹逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)检测C.pn感染后不同时间点TLR2和TLR4 mRNA的表达水平；⑺用小鼠抗C.pn单克隆抗体和兔抗大鼠TLR2抗体进行荧光染色，共聚焦显微镜观察感染后C.pn与TLR2在VSMC内的位置关系；⑻用TLR2阻断剂阻断TLR2的作用，RT-PCR检测各组髓样分化蛋白88(Myeloid differentiation protein88，MyD88)mRNA表达水平以检测TLR2阻断剂的效能；⑼Wound-healing实验和Transwell实验观察TLR2在C.pn感染促进VSMC迁移中的作用。
结果：①原代培养的VSMC光镜下观察呈“峰与谷”样生长，细胞形态多呈宽大的长梭形，核大。免疫荧光检测结果显示VSMC a-SM actin呈阳性，呈现束状肌丝特征；②PCR在感染的VSMC内检测到437 bp的C.pn特异性DNA片段；卢戈氏碘染色可见C.pn包涵体呈红棕色或红褐色；AO染色和免疫荧光染色法观察到C.pn感染后在VSMC内以包涵体和点状感染灶两种形态存在，包涵体的体积比点状感染灶大，但量相对较少，提示C.pn感染VSMC模型成功建立；③透射电镜下可见，C.pn感染24h后，VSMC内出现多个体积较小的包涵体；感染48 h后，包涵体内出现含致密核结构的原体(elementary body，EB)及呈膜泡样的网状体(reticulate body，RB)等C.pn特征性超微结构；感染72h后，包涵体内RB和EB数量明显增多，成熟EB比例显著增大。细胞在C.pn感染后不同时间段出现相应的超微结构改变；④Wound-healing实验结果显示，C.pn感染VSMC24 h后，细胞向划痕中央迁移的距离明显大于正常对照组(P<0.05)。Transwell实验结果显示，C.pn感染VSMC24 h后，C.pn感染组的细胞迁移数明显多于正常对照组(P<0.01)；⑤RT-PCR结果显示，C.pn感染VSMC后TLR2被激活，其表达量迅速升高，在感染后8 h即可达到高峰，并持续至24 h，其相对表达量高于TLR4；⑥共聚焦显微镜观察发现C.pn感染后，TLR2表达位点发生变化，主要聚集于包涵体周围；⑦TLR2阻断剂阻断TLR2的作用后，C.pn感染引起的MyD88 mRNA表达增强可被明显抑制(P<0.01)；⑧Wound-healing实验和Transwell实验结果均显示，C.pn感染24 h后的VSMC迁移能力明显强于TLR2阻断剂预处理的C.pn感染组细胞(P<0.05)。
结论：成功建立C.pn感染VSMC模型，C.pn感染能够显著增强VSMC的迁移能力，TLR2在C.pn感染诱导VSMC迁移过程中发挥重要作用。