三种中国野生铁线莲组织培养研究

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论文以当年生带芽茎段为外植体建立中国三个野生种铁线莲再生体系,为野生种铁线莲的快速推广提供技术支持;同时为探索高频率再生植株的形态发生途径和离体培养条件,也对湖州铁线莲茎段诱导体细胞胚胎和细胞学特征进行了研究。主要结论如下:1、中国三个野生种铁线莲组织培养快繁技术(1)三种铁线莲外植体不定芽诱导适宜基本培养基为1/2MS培养基。生根培养适宜基本培养基为MS培养基。(2)增殖培养:湖州铁线莲腋芽增殖适宜培养基为1/2MS+0.5mg/L6-BA+0.3mg/LIBA+Sucrose30.0g/L,增殖系数为4.43;大花铁线莲腋芽增殖适宜培养基为1/2MS+0.5mg/L6-BA+0.3mg/L IBA+Sucrose40g/L,增殖系数为4.42;短柱铁线莲腋芽增殖适宜培养基为1/2MS+0.3mg/L6-BA+0.1mg/L IBA+Sucrose20g/L,增殖系数为4.23。(3)生根培养:湖州铁线莲适宜生根培养基为MS+NAA0.05mg/L,生根率为60%;大花铁线莲适宜生根培养基为MS+0.08mg/L NAA+0.1mg/LIBA,生根率为50%;短柱铁线莲适宜生根培养基为MS+0.1mg/L NAA+0.5mg/LIBA,生根率为43.3%。(4)瓶苗移栽:瓶苗移栽春季较好,基质以珍珠岩与蛭石1:2的比例较为适宜,移栽苗成活率可达80%以上。2、湖州铁线莲体细胞胚胎发生研究(1)胚性愈伤组织适宜诱导培养基为1/2MS+0.2mg/L TDZ+0.2mg/L NAA+100mg/L肌醇+200mg/L水解酪蛋白+1g/L活性炭。附加蔗糖30g/L,琼脂5.8g/L,pH值为5.8,暗培养。(2)胚性愈伤继代增殖适宜培养基为1/2MS+0.05mg/LTDZ+0.05mg/L NAA+100mg/L肌醇+200mg/L水解酪蛋白+1g/L活性炭。胚性愈伤组织在继代增殖5次以后增殖系数趋于稳定。(3)胚性愈伤组织诱导体细胞胚胎的形成在1/2MS+0.03mg/LABA+0.05mg/L NAA中效果较好,体细胞胚胎的诱导率可达10.526%。3、通过组织细胞学方法研究湖州铁线莲愈伤组织及体细胞胚胎的起源与发生部位,发现湖州铁线莲多是单细胞起源,表面或近表面发生,体细胞胚经过球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚进而发育成完整的植株。
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