目的转移是恶性肿瘤的生物学特征之一,是引起恶性肿瘤患者死亡的主要原因。据发病趋势估计,到2015年,全世界恶性肿瘤的发病人数将达1500万,死亡将超过1000万。因此,能否控制肿瘤转移,在相当程度上决定了恶性肿瘤治疗的成败,也是当今恶性肿瘤理论和临床研究中的难题。目前西医治疗肿瘤转移的疗效尚不确切,而中医药防治肿瘤转移逐渐受到广泛关注。导师邱幸凡教授总结多年临床经验认为,肿瘤转移是一个多重因素共同作用的复杂过程,其中正气亏虚、癌毒炽盛和络脉痹阻是导致肿瘤转移的主要机理,故提出“扶正通络解毒法”防治肿瘤转移。临床运用表明,此法防治肿瘤转移,能有效提高患者生活质量、延长生存期和降低死亡率。2006年我国城乡居民主要死亡原因的调查显示,肺癌是我国常见恶性肿瘤死亡的主要原因之一。故本课题在探讨肿瘤转移理论的基础上,以肺癌转移为例,运用补肺通络解毒方对Lewis肺癌自发肺转移模型小鼠抗肺癌转移进行实验研究,探讨补肺通络解毒方的疗效及其作用机理,为抗肿瘤转移药物的开发及应用提供理论基础和实验依据。方法1、理论研究采用文献整理,结合临床实践的方法,探讨肿瘤转移的病因病机和治疗法则。2、补肺通络解毒方对Lewis肺癌自发肺转移模型小鼠抗肺癌转移治疗作用及其机理的实验研究：采用动物实验的方式,设立五组：正常对照组、模型对照组、补肺通络解毒方低剂量组、补肺通络解毒方高剂量组、环磷酰胺组。通过复苏、接种、保种Lewis肺癌瘤株,选取生长良好的Lewis肺癌组织,剪碎匀浆,制成细胞悬液,接种于40只C57BL/6小鼠右腋皮下,依据文献复制C57BL/6小鼠Lewis肺癌自发肺转移模型。补肺通络解毒方为邱教授的经验方,由黄芪、人参、全瓜蒌、莪术、蜈蚣、龙葵组成。模型复制成功后,模型对照组、补肺通络解毒方低剂量组、补肺通络解毒方高剂量组、环磷酰胺组于接种后第二天开始给予相应的药物灌胃,正常对照组给予生理盐水灌胃,连续28日,第29天颈椎脱臼处死小鼠。采取标本,进行以下检测：各组抑瘤率、抗肺转移抑制率、脾指数、外周血T淋巴细胞亚群含量；以RT-PCR法观察模型对照组、补肺通络解毒方低剂量组、补肺通络解毒方高剂量组、环磷酰胺组小鼠瘤细胞VEGF mRNA.nm23 mRNA表达的情况；以免疫组织化学法检测模型对照组、补肺通络解毒方低剂量组、补肺通络解毒方高剂量组、环磷酰胺组小鼠瘤细胞VEGF蛋白、nm23蛋白和AQP-1蛋白表达的情况。结果1、通过对文献的整理,结合临床实践,提出“正虚络痹毒结”是肿瘤转移的基本病机,恶性肿瘤是由于一种特殊的毒邪作用于人体所致,这种毒邪由多种致病邪气积聚体内,日久突变而来,与普通毒邪有根本的区别,我们称之为“癌毒”。人体产生恶性肿瘤的病机为“正气亏虚,癌毒化生”,而肿瘤转移的病机是“正气亏虚,癌毒炽盛,络脉痹阻”：人体正气亏虚、癌毒化生,导致恶性肿瘤产生；在肿瘤发生之后,由于个人调摄不当,或用药过度导致亏虚的正气进一步损伤,同时癌毒相对于亏虚的正气日渐炽盛,络脉痹阻,癌毒或附着于常毒,最终正不抑邪,癌毒突破正气的约束,四散于全身,即发生转移。癌毒的转移通道是人体的络脉；癌毒转移的目的地是脏气亏损的易感脏腑。“扶正通络解毒”是防治肿瘤转移的治疗法则。其中扶正是防治肿瘤转移的根本,补益气血以强正气之本,补益脏腑以强正气之根；解毒是防治肿瘤转移的关键,解除常毒以绝癌毒化生之源,涤除癌毒以绝肿瘤转移之根；通络是防治肿瘤转移的重要环节,通络消瘤以除肿瘤之体,虫类搜剔以除肿瘤转移之根。2、补肺通络解毒方低剂量组抑瘤率可达44.62%,肺转移抑制率可达77.95%,与环磷酰胺组比较有非常显著差异(P<0.01),说明造模成功,补肺通络解毒方对肿瘤转移有抑制作用,在抑制转移方面补肺通络解毒方效果优于环磷酰胺。3、补肺通络解毒方低剂量组的脾指数与环磷酰胺组比较有显著差异(P<0.05),在CD4+/CD8+比值上,补肺通络解毒方高剂量组、低剂量组与正常对照组比较无显著差异(P<0.05),补肺通络解毒方高剂量组与环磷酰胺组比较有显著差异(P<0.05),补肺通络解毒方低剂量组与环磷酰胺组比较有非常显著差异(P<0.01),说明补肺通络解毒方有良好的提高免疫的作用。4、免疫组化检测VEGF表达,结果显示补肺通络解毒方低剂量、补肺通络解毒方高剂量组均可降低VEGF蛋白的表达,补肺通络解毒方高剂量组、补肺通络解毒方低剂量组与模型对照组比较,均有非常显著差异(P<0.01). RT-PCR法检测VEGF mRNA表达,结果显示补肺通络解毒方低剂量组、补肺通络解毒方高剂量组均可降低VEGF表达,补肺通络解毒方高剂量组、补肺通络解毒方低剂量组与模型对照组比较,均有非常显著差异(P<0.01),说明补肺通络解毒方能抑制肿瘤微血管生成。5、免疫组化法检测瘤细胞nm23蛋白表达,结果显示补肺通络解毒方低剂量、补肺通络解毒方高剂量均可提高nm23蛋白的表达,补肺通络解毒方低剂量、补肺通络解毒方高剂量组与模型对照组比较,有非常显著差异(P<0.01)；RT-PCR法检测瘤细胞nm23 mRNA表达,结果显示,补肺通络解毒方低剂量、补肺通络解毒方高剂量均提高nm23表达,补肺通络解毒方低剂量、补肺通络解毒方高剂量组与模型对照组比较,有非常显著差异(P<0.01),说明补肺通络解毒方能提高nm23蛋白的表达,从而抑制肺癌转移。6、免疫组化检测瘤细胞AQP-1蛋白表达,结果显示补肺通络解毒方低剂量、补肺通络解毒方高剂量均可降低AQP-1蛋白的表达,补肺通络解毒方低剂量、补肺通络解毒方高剂量组与模型对照组比较,有非常显著差异(P<0.01),表明补肺通络解毒方能降低AQP-1的表达,从而抑制肺癌转移。结论补肺通络解毒方具有抑制C57BL/6小鼠Lewis肺癌自发肺转移模型肺转移作用,能提高脾指数,升高外周血T淋巴细胞亚群含量,有良好的提高免疫的作用,同时能抑制肿瘤微血管生成,还可提高nm23蛋白及nm23mRNA的表达水平、降低AQP-1蛋白的表达水平。提高免疫、抑制肿瘤血管生成、抑制VEGF蛋白及VEGF mRNA的表达水平、AQP-1蛋白的表达水平和提高nm23蛋白及nm23 mRNA的表达水平可能是补肺通络解毒方抗肿瘤转移的部分机理。