22个李品种(品系)果实主要性状分析及SRAP分子标记研究

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本试验以四川省达州市通川区、万源市、宣汉县、大竹县、开县5个县区的22个李品种(品系)为试材,对达州地区优良李种质资源果实主要性状进行测试,并利用相关序列扩增多态性(SRAP)分子标记对22个李品种(品系)亲缘关系进行了分析。主要研究结果如下:1、22个李品种(品系)果实主要性状包括外观品质、内在品质等均存在一定差异。巴山脆李果实表现出平均单果质量大,糖酸比值高,可溶性固形物高的特点。巴山脆李果实品质均优于其他21个品种(品系)。来自万源市极晚熟品种(品系)平均单果质量、糖酸比、可溶性固形物值均极显著低于其他地区品种(品系),总酸含量极显著高于其他地区。来自达县的早熟品种(品系)与其他地区未表现出显著差异。中熟及中晚熟品种(品系)间未表现显著差异。果实性状存在差异,表现为长圆形(果形指数大于1-100)、圆形(果形指数在1.000-1.100)、扁圆形(果形指数小于1.000)。2、对22个李品种(品系)基因组DNA提取方法进行了改良以及SRAP-PCR体系进行了优化。对基因组DNA提取方法CTAB法进行改良。缩短水浴时间,将之前水浴时间0.5h缩短为10min,增加氯仿/异戊醇(24:1)抽提次数,将抽提次数由2次增加为3次。利用改良CTAB法得到的基因组DNA进行电泳,电泳得到的基因组DNA带型清晰,亮度高,点样孔亮度不明显,结果表明使用改良CTAB法得到的基因组DNA浓度高、质量好。使用核酸蛋白仪检测利用改良CTAB法提取的基因组DNA,结果表明22个李品种(品系)基因组DNA D260nm/D280nm均在1.71-1.91之间。利用Gel-Pro analyzer软件进行条带检测,得到第9个正交设计组合的条带数最丰富。使用正交设计直观分析法得到,第9个正交设计组合的分数最高。综合两种分析方法得到SRAP分子标记最佳反应体系为1.5mmol/L dNTPs、3mmol/L Mg2+、1.25μmol/L引物、0.5ng/20μ.L基因组DNA、0.4U/25μL TaqDNA聚合酶。3、利用相关序列扩增多态性(SRAP)标记对巴山脆李及达州地区优良脆李资源进行了亲缘关系分析,为巴山脆李品种的鉴定和其他李资源的保护及利用提供理论依据。研究结果表明:从180对引物组合中筛选出12对多态性高、扩增谱带清晰的SRAP引物,对22个李品种(品系)进行扩增,共获得103条谱带,其中多态性谱带64条,多态性比率为60.34%。平均每对引物组合扩增出多态性谱带5.42条。12对引物组合的扩增位点在达州地区李种质资源间表现出较高的多态性水平,其PIC值在0.2778-0.7613之间,大部分位点的PIC值>0.5。利用UPGMA法构建树状聚类图,在相似性系数0.68处可将22份品种(品系)质分成3组。聚类结果与按果形分类结果一致,与其地理位置和熟期也存在一定的相关性。在相似系数0.72处,巴山脆李单独分为一组,证明了巴山脆李与其他试材的遗传差异。通川8号和万源1号相似系数为0.8409,亲缘关系最近。大竹鸡心李作为试材中唯一红色果皮材料,未单独成为一组,表明聚类结果与果皮颜色无明显相关性。
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