论文部分内容阅读
背景:糖尿病肾病(diabeticnephropathy,DN)是糖尿病严重的微血管并发症之一,糖尿病肾病一旦进展到显性蛋白尿期将不可逆转的进行性发展,最终发展成为终末期肾病,给患者带来严重的负担。迄今为止,鉴别糖尿病肾病与非糖尿病肾病(non-diabetic renal disease,NDRD)的金标准是肾穿刺活检术,目前,尚无可靠的无创诊断标志物用以鉴别DN和NDRD。本研究旨在通过分析DN及NDRD患者之间尿液糖蛋白糖链谱差异来寻找两者间的无创鉴别诊断标志物。方法:本研究纳入2015年3月至2016年3月在中国人民解放军总医院肾内科行肾穿刺活检术的19例DN患者、18例NDRD患者,使用凝集素芯片对以上37例患者的尿液糖蛋白糖链谱进行比较分析,使用Ratio分析和one-way ANOVA来对两组间有差异的尿蛋白糖链结构进行筛选。随后使用另外32例(15例DN患者,17例NDRD患者)患者尿液样本制备的尿蛋白芯片对凝集素芯片筛选出的差异糖链结构进行验证,并制作ROC曲线来分析筛选出来的糖链结构对DN和NDRD的鉴别诊断价值。最后,本研究还使用SDS-PAGE及lectin blotting技术对筛选出来的差异糖链结构进行了进一步的验证。结果:(1)使用凝集素芯片对尿蛋白糖链谱进行分析,结果显示,DN与NDRD患者尿蛋白糖链谱存在明显差异,其中,凝集素DSA识别的(β-1,4)-linkedGlcNAc糖链结构在DN患者尿蛋白中的相对丰度明显高于NDRD患者(fold change>1.99,p<0.001),而在MN患者中,凝集素RCA120识别的β-Gal糖链结构的相对丰度高于其他糖链结构,在IgAN患者中,凝集素STL识别的末端G1cNAc糖链结构在IgAN患者尿蛋白中的丰度较高。(2)使用尿蛋白芯片技术对凝集素芯片结果进行验证也发现,凝集素DSA识别的(β-1,4)-linked GlcNAc糖链结构在DN与NDRD患者尿蛋白中的相对丰度存在显著差异(p<0.05),并且ROC曲线分析结果表明凝集素DSA识别的糖链结构能够有效的区分 DN 与 NDRD(AUC=0.941,p<0.001)。(3)(β-1,4)-linkedG1cNAc 糖链结构的分子量为 50000,凝集素 DSA 的 SDS-PAGE及Lectin blotting研究结果显示,分子量约为50000的糖蛋白在DN及NDRD患者尿蛋白之间存在明显差异,进一步提示(β-1,4)-linked G1cNAc糖链的丰度在DN患者中较NDRD患者高。