中国大鲵FoxO基因亚族cDNA克隆、表达及生物信息学分析

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FoxO(Forkhead box O)基因是Fox(Forkhead transcription factor)基因家族亚族,其广泛存在于脊椎动物和无脊椎动物之中。本研究扩增获得中国大鲵FoxO1,FoxO3和FoxO4基因c DNA全长序列以及FoxO6基因c DNA部分序列,重点分析中国大鲵FoxO蛋白质与其他物种间结构和功能的相似性与差异性。同时选取NCBI上公布的多个FoxO基因编码CDS序列,重建FoxO基因的系统发育树并进行选择压力分析,对FoxO基因亚族的起源和进化进行研究分析。最后通过荧光定量实验探究FoxO基因在不同时期的雌性中国大鲵各组织表达情况以及雌雄各组织表达差异。得到以下结果:1.FoxO1基因cDNA序列全长2663bp,编码615aa;FoxO3基因c DNA序列全长2107bp,编码640aa;FoxO4基因c DNA序列全长2599bp,编码548aa;FoxO6基因部分序列1894 bp部分编码583aa;编码蛋白序列均具有高度保守的91aa的FH结构域,三级结构预测显示由三个α螺旋和三个β折叠以及一个较短的螺旋结构η1。存在多个与哺乳动物相同的磷酸化位点,与硬骨鱼相比有多个大片段的缺失,可能是进化过程中无用序列的删除。中国大鲵FoxO核质定位调控依然十分重要。中国大鲵Fox蛋白FH结构域在α3处保守性最高,FoxO的FH结构域与其他Fox家族5个氨基酸的插入。2.FoxO1基因是FoxO基因在脊椎动物中的祖先序列;在进化过程中经历正选择作用;中国大鲵FoxO1与鱼类亲缘关系较远,而中国大鲵FoxO4与软骨鱼聚为一簇,FoxO3基因与两栖类亲缘关系最近,体现其作为两栖动物独特的进化地位。中国大鲵Fox蛋白FH结构域与其他物种同源性较高,并且Fox N/R可能是祖先基因。3.中国大鲵FoxO基因表达情况具有明显的组织特异性,时空特异性和雌雄差异,一般幼体雌性各组织表达量高于雄性,尤其在卵巢组织中,FoxO1和FoxO6基因可能参与早期卵巢发育和分化过程,FoxO3可能参与调节卵泡的关闭和激活;不同的FoxO基因发挥主要功能的组织不同,FoxO4基因可能是中国大鲵肝脏组织中发挥作用的主要基因;FoxO4基因可能是大鲵肾脏中参与调节氧化应激的主要基因;FoxO3基因可能是中国大鲵脾脏中参与免疫调节的主要基因。
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