论文部分内容阅读
现代大量研究均表明,胃经穴位电针对胃肠功能有良好的调整作用,但其确切机制仍未完全阐明。进一步阐明电针足三里穴对胃运动、胃电双向调节的发生机制,对指导临床治疗具有重要的意义。本实验在电针大鼠足三里穴情况下,在观察胃电图变化的基础上,研究针刺足三里穴引起胃电起搏区Cajal间质细胞(interstitial cells of cajal, ICCs)的变化及与ICCs信息传递密切相关的缝隙连接蛋白43(CX43)的变化、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族中的ERK的变化情况,并同步采用基因芯片技术,研究电针大鼠足三里穴引起信号转导通路及标志基因的变化,为探讨电针对胃运动的调节作用机制提供全新的理论依据。方法:①将大鼠随机分成足三里组、非经非穴组、非针刺组,采用电生理学方法同步观察电针后胃电的变化;②采用免疫组化荧光双重标记ICCs与CX43、ICCs与ERK的方法,观察针刺足三里穴引起胃电起搏区ICCs的变化、与ICCs信息传递相关的CX43的变化、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族中的ERK的变化情况;③采用基因芯片技术,按TRIZOL法抽提三个胃组织标本总RNA,经纯化、逆转录合成掺入生物素标记的cRNA合成探针,与美国SuperArray公司的Oligo GEArray基因芯片杂交,扫描芯片荧光信号图像,计算机分析,比较基因及信号转导通路差异。结果:1.电针足三里穴对胃电有明显影响。电针足三里穴可使胃电频率及波幅增高,提示电针足三里穴对胃动力有明显促进作用。2.电针足三里穴可显著激活胃肌间和肌层ICCs表达,及与ICCs信息传递密切相关CX43的表达;电针足三里穴能促进肌间和肌层与ICCs调节胃运动的细胞信号转导之MAPK途径中ERK的上调表达。3.筛选出与针刺作用相关的标志基因及信号转导通路。三个标本中,电针足三里组明显差异表达的标志基因hoxa1、lep、bcl-2上调,分属于维甲酸通路、胰岛素通路、Survival通路、雌激素通路、磷脂酶C通路;电针足三里组明显差异表达的标志基因ptgs2下调,属于磷脂酶C通路。其中lep基因的上调表达,与ICCs的激活呈正相关关系,而ptgs2基因的下调表达与ICCs的激活呈负相关关系,可能在胃运动功能调节过程中发挥作用。结论:电针足三里穴对大鼠胃电具有明显的促进作用;电针足三里穴促进胃运动的机制可能通过激活ICCs而产生显著电生理活动、通过ICCs及SMC之间的缝隙连接蛋白传递达到平滑肌进而调节胃运动。这一作用的完成,可能是通过ICCs信号转导MAPK途径中ERK通路实现的;电针调控大鼠胃运动的机制与某些差异基因上调或下调表达及其相关信号转导通路有关。