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研究背景:年龄相关性黄斑变性（age-related macular degeneration,AMD）是一种累及眼底黄斑部的不可逆的退行性病变,严重损害人的视力健康。随着我国老龄人口的不断增加,由于AMD导致的患者数量也在不断增加,使越来越多的患者因AMD而丧失视力,导致视力残疾。迄今为止,AMD的发病机制仍不是十分清楚,可能与基因背景、环境等多种因素相关。研究表明,AMD的发生发展与氧化应激相关,是由于视网膜中大量的活性氧产生（reactive oxygen species,ROS）而导致的对视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium,RPE）的损伤。位于视网膜最外层的RPE细胞是重要的视网膜膜脉络膜屏障,具有多种重要的生理功能。它参与光感受器外节盘膜的吞噬、物质的传递与输送、以及视蛋白代谢等多种作用,并起到对视细胞的支持与营养作用。RPE损伤将导致视网膜脉络膜屏障的破坏,使大量有毒物质或新生血管长入到视网膜,造成视细胞功能的破坏,严重影响视功能。α-倒捻子素是从藤黄科藤黄属植物山竹子果壳中分离出来的、具有生物活性的物质。近年来发现,α-倒捻子素具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗癌等多种生物活性。本实验将通过氧应激反应建立氧化损伤模型,通过在体（in vivo）和离体（in invitro）观察α-倒捻子素对视网膜氧化损伤保护作用的效果。方法:（1）In invitro试验:将RPE细胞随机分为三组,即正常对照组、氧化应激组（H202诱导组）和α-倒捻子素治疗组（根据α-倒捻子素浓度不同分为各亚组）。CCK8法检测α-倒捻子素对细胞毒性作用,α-倒捻子素干预后对H202诱导的细胞的活性变化,流式细胞仪检测各组细胞活性氧ROS水平;免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞:核因子NF-E2相关因子（transcriPtion factor nuclear factor-Erythroid-2-related factor 2,Nrf2）、血红素氧合酶-1（Heme oxygenase-1,HO-1）、人醌 NADH 脱氢酶 1（NADH Dehydrogenase,Quinone 1,NQO1）、核因子-kB（nuclear factor-kaPPaB,NF-kB）蛋白表达变化。（2）In vivo实验:选取6-8周Balb/c小鼠45只,并进行随机分配,每组15只,分为对照组、单纯光照组、α-倒捻子素组。利用光照建立视网膜氧化损伤模型。α-倒捻子素组小鼠在接受光照前7天开始,每日以30mg/（kg·d）α-倒捻子素进行灌胃,连续7日,于第5日开始接受光照,进行造模。单纯光照组与α-倒捻子素组小鼠均采用5000±2001x白色LED光连续照射1h。模型完成后72h记录各组小鼠闪光视网膜电图;应用光镜观察各组小鼠视网膜形态学变化,比较各组视网膜外核层厚度变化;通过TUNEL法,检测各组小鼠视网膜凋亡细胞数量。剥离视网膜,检测各组小鼠视网膜组织匀浆中caspase-3活性,丙二醛含量,SOD,Gpx活性以及GSH含量。免疫荧光法标记Nrf2在各组视网膜中的分布,免疫印迹法检测Nrf2以及HO-1在各组小鼠视网膜中的表达水平。结果:（1）In invitro试验结果:CCK8法检测结果显示:当α-倒捻子素浓度在0-12 μ M之内时,细胞活性无明显变化,当浓度达到16 μM及其以上时,细胞活性下降（P<0.05）。而经过α-倒捻子素预处理后,浓度在0-12 μ M之间的α-倒捻子素治疗组细胞活性较氧化应激组有所增加（P<0.05）。ROS结果显示:H2O2诱导后,氧化应激组ROS生成明显增多（P<0.05）;较氧化应激组,8μM和12 μM.α-倒捻子素均表现出一定的ROS清除能力（P<0.05）,其中,12 μM组ROS清除能力更强。Western blot结果显示:与正常对照组相比,氧化应激组Nrf2、HO-1、NQ01、NF-kB蛋白表达增高;与氧化应激组相比,12 μ M.α-倒捻子素治疗组Nrf2、HO-1、NQ01、NF-kB蛋白表达增高（P<0.05）。（2）In vivo实验结果:闪光视网膜电图（F-ERG）显示α-倒捻子素组视网膜功能损伤较光照组明显减轻（P<0.05）。光镜下,α-倒捻子素组视网膜结构损伤相较于光照组明显减轻,外核层厚度较光照组明显增加（P<0.05）。荧光显微镜下可见,光照组视网膜外核层凋亡细胞较正常对照组明显增多（P<0.05）,α-倒捻子素组视网膜外核层凋亡细胞较光照组明显减少（P<0.05）。光照后,小鼠视网膜中caspase-3活性及MDA含量均较正常对照组增高（P<0.05）,α-倒捻子素组caspase-3活性及MDA含量则较光照组明显降低（P<0.05）。SOD、Gpx活性以及GSH含量在光照组中较正常对照降低（P<0.05）,在α-倒捻子素组较光照组增高（P<0.05）。免疫印迹法测得α-倒捻子素组HO-1表达水平较光照组高。荧光显微镜下见Nrf2阳性表达细胞主要分布在视网膜外核层,光照后,Nrf2被激活,且α-倒捻子素组Nrf2表达水平高于光照组（P<0.05）。结论:α-倒捻子素能够通过调控Nrf2表达,激活其下游的内源性抗氧化防御系统SOD、Gpx、GSH以及HO-1,减少视网膜组织的脂质过氧化,而到达对视网膜组织的保护作用;α-倒捻子素能抑制由光照引起的感光细胞凋亡,改善由光照导致的视网膜组织形态改变及视网膜功能减退。α-倒捻子素的抗氧化作用将为临床治疗AMD提供新的思路。