一重和三重脑震荡大鼠MWM空间认知行为与大脑GABABR2、VGAT表达变化研究

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第一部分Morris水迷宫空间认知行为研究[目的]建立一重性脑震荡pure cerebral concussion, PCC)与不同打击间隔的三重性脑震荡(multiple cerebral concussion, MCC)大鼠模型,观察PCC和MCC后大鼠水迷宫(1norris water maze, MWM)行为学变化,评估其空间认知功能,从而为临床脑震荡(cerebral concussion, CC)患者的诊断与治疗提供参考。[方法]1、动物分组:选取成年健康SD大鼠40只,雌雄各半,体重260-280g。随机分为Control组(10只)和PCC、MCC24h、MCC72h损伤组(每组10只)。2、应用金属单摆打击装置复制PCC、MCC24h、MCC72h损伤大鼠模型。3、应用Morris水迷宫实验评估各实验组大鼠空间认知功能,包括16d水下平台实验、2d水上平台实验和1d无平台实验。[结果]1、水下平台实验中,Control组大鼠逃避潜伏期(找到平台的时间)表现为先迅速下降,然后趋于平稳;各损伤组大鼠逃避潜伏期表现为先迅速下降,于第8d左右回升,然后趋于平稳。与Control组相比,PCC、MCC24h、MCC72h组大鼠逃避潜伏期均明显延长,且PCC组的1-4d、MCC24h组的1-16d、MCC72h组除第7d、10d、15d外的其余13d均具有统计学意义(P<0.05)。与PCC组相比,MCC24h、MCC72h组大鼠逃避潜伏期均明显延长,且MCC24h组的1-16d、MCC72h组的第3d、13d均具有统计学意义(P<0.05)。与MCC72h组相比,MCC24h组大鼠逃避潜伏期明显延长,且1-14d具有统计学意义(P<0.05)。2、水上平台实验中,MCC组大鼠逃避潜伏期明显延长,差异有统计学意义(P<0.05)。3、无平台实验中,相对于其他各实验组,MCC24h组大鼠停留在原平台所在象限的时间明显减少,且差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]1、不同的CC损伤类型对大鼠的空间认知功能均有明显的损害作用。2、相对于PCC, MCC对大鼠空间认知功能的损害作用更为显著。3、而在MCC中,延长损伤间隔时间,可有效降低SIS对大鼠空间认知功能的损害作用。第二部分GABABR2和VGAT蛋白表达定量研究[目的]建立一重性脑震荡(PCC)与不同打击间隔的三重性脑震荡(MCC)大鼠模型,运用Western-Blot检测,定量分析大鼠伤后各脑区GABABR2和VGAT表达含量的变化,从而为临床脑震荡(CC)患者的诊断与治疗提供参考。[方法]1、动物分组:选取成年健康SD大鼠152只,雌雄各半,体重260-280g。随机分为Control组(8只)和PCC、MCC24h、MCC72h损伤组(每组48只)。2、应用金属单摆打击装置复制PCC、MCC24h、MCC72h损伤大鼠模型。3、应用Western-Blot实验分别测定各实验组大鼠大脑额叶皮质、脑干、海马、基底节及中隔5个脑区伤后1d、2d、4d、8d、16d、24d的GABABR2和VGAT表达含量。[结果]1、GABABR2结果:与Control组相比,损伤组大鼠各脑区伤后1d、2d、4d、8d、16d、24d的GABABR2表达均明显下降,各时间点均有统计学意义(P<0.05),表现为先迅速下降,于第8d达到最小值,然后缓慢上升。同一脑区PCC、MCC24h、MCC72h组间存在明显差异,MCC24h组下降幅度最明显,其次是MCC72h组,而PCC组下降幅度最小。2、VGAT结果:与Control组相比,损伤组大鼠各脑区伤后VGAT的表达先迅速上升,于伤后第8d达到高峰,然后缓慢下降,伤后第2d、4d、8d具有统计学意义(P<0.05),同一脑区PCC、MCC24h、 MCC72h组间存在明显差异,MCC24h组上升幅度最明显,其次是MCC72h组,而PCC组上升幅度最小。[结论]1、不同的CC损伤类型均能减少GABABR2并增加VGAT在大鼠伤后各脑区的表达,其可能在继发性的颅脑损伤发展过程中扮演重要角色。2、在与大鼠空间认知功能密切相关的海马和前额叶皮质中,GABABR2表达最低点出现在伤后8d,而VGAT的表达高峰则出现在伤后4d。3、相对于PCC, MCC对大鼠空间认知功能的损害作用更为显著;而在MCC中,延长损伤的时间间隔,可有效降低SIS对大鼠空间认知功能的损害作用。
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