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第一部分：地西他滨联合改良CAG方案治疗AML作用机制体外研究目的：模拟地西他滨联合改良CAG方案体外处理人源AML细胞系U937、Kasumi-1,探索联合用药对白血病细胞增殖、凋亡、分化、细胞周期及增殖、凋亡调控相关蛋白的影响。方法：培养人源AML细胞系U937、Kasumi-1细胞,分别给予单药地西他滨(DAC组)、CAG(CAG组)、CAG前地西他滨预处理(D-CAG组)、CAG后加地西他滨处理(CAG-D组),另设不行药物干预组(空白对照组)。CCK-8法检测不同给药组对U937、Kasumi-1细胞增殖的影响。Annexin V/PI双染流式细胞术检测不同药物组对细胞凋亡的影响。流式细胞术检测不同药物组细胞表面分化抗原CDl 1b表达及细胞周期分布变化。Western blot方法检测不同药物处理组细胞中c-myc、bcl-2、caspase-3及caspase-9蛋白表达变化情况。结果：1、在U937细胞中,与空白对照组比较DAC组、CAG组、D-CAG组、CAG-D组细胞存活率分别为：35.3±6.6%、52.0±4.3%、16.0±1.0%、36.8±14.6%,其中D-CAG组较其它各组对于细胞的增殖抑制更明显,差异有统计学意义(P<0.05)；在Kasumi-1细胞中,与空白对照组比较DAC组、CAG组、D-CAG组、CAG-D组细胞存活率分别为：87.0±3.6%、37.0±1.0%、33.0±2.0%、33.0+3.6%,其中地西他滨联合CAG组与CAG组比较无统计学差异。2、在U937细胞中,空白对照组、DAC组、CAG组、D-CAG组、CAG-D组诱导细胞凋亡率分别为：2.7±1.6%、24.3±6.4%、16.7±11.7%、65.7±17.4%、24.7±2.9%, 其中D-CAG组与其它组比较明显增加U937细胞的凋亡率,差异有统计学意义(P<0.05)；在Kasumi-1细胞中,同样方式处理组细胞凋亡率分别为：6.0±0.5%、20.3±2.2%、36.2±0.67%、45±0.9%、42.4±1.5%,其中D-CAG组及CAG-D组较DAC组及CAG组均明显增加细胞凋亡率,差异有统计学意义(P<0.05)。3、在U937细胞中,空白对照组、DAC组、CAG组、D-CAG组、CAG-D组分化抗原CD11b表达率分别为：1.1±1.1%、4.2±2.5%、76.3±0.3%、2.7±2.0%、22.9±7.2%,其中CAG组CD11b表达率最高,其次是CAG-D组,较其它各组比较差异有统计学意义(P<0.05)；在Kasumi-1细胞中未发现各实验组较空白对照组CD11b表达有明显变化。4、在U937细胞中,空白对照组、DAC组、CAG组、D-CAG组、CAG-D组S期细胞比例分别为：43.0±3.6%、42.7±5.5%、61.7±6.7%、52.3±7.5%、23.3±6.1%,G2/M期细胞比例分别是：7.0±2.4%、10.5±5.6%、26.1±5.9%、9.0±2.2%、54.7±10.6%,其中CAG组与其它各组比较S期细胞比例明显增加,差异有统计学意义(P<0.01),而CAG-D组S期细胞比例明显下降,与其它各组比较有统计学差异(P<0.01)；此外,CAG-D组G2/M细胞比例明显高于D-CAG组及CAG组,差异有统计学意义(P<0.01)；在Kasumi-1细胞中,上述各组S期细胞比例分别为：43.7±2.9%、41.7±0.6%、32.0±2.0%、28.7±5.7%、34.7±1.5%,G2/M期细胞比例分别是：7.8±0.1%、21.8±2.9%、9.9±4.2%、11.7±5.5%、9.7±1.4%, 其中CAG组、CAG-D组、D-CAG与DAC组和空白对照组比较其S期细胞比例明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),但CAG组与CAG-D组、D-CAG组比较无统计学差异；除DAC组G2/M期细胞比例略高外其它各实验组之间无明显差异。5、在U937/Kasumi-1细胞中,同对照组比较CAG-D组和D-CAG组中凋亡相关蛋白caspase-3及caspase-9表达明显增加,而c-myc及Bcl-2蛋白部分表达下降。结论：1.低剂量地西他滨联合CAG方案处理U937细胞对于抑制细胞增殖有明显协同作用,尤其在D-CAG组更明显。在Kasumi-1细胞中未发现类似现象。2.低剂量地西他滨联合CAG具有明显协同诱导U937、Kasumi-1细胞凋亡作用,尤其在CAG给药前给予小剂量地西他滨预处理诱导凋亡更明显。3.CAG可明显诱导U937细胞分化,其次是CAG-D组,但对于Kasumi-1细胞无明显诱导分化作用。4.在地西他滨敏感细胞株U937中,CAG处理后可促进细胞进入S期,CAG-D组对S期细胞作用最显著,可促进细胞进入G2/M期,而在Kasumi-1细胞中未发现类似现象。5.低剂量地西他滨联合CAG增强对U937、Kasumi-1细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用可能与下调c-myc、Bcl-2及上调caspase-3和caspase-9蛋白相关。第二部分：地西他滨联合改良CAG方案治疗老年AML临床疗效及安全性研究目的：评估改良CAG方案联合后程地西他滨方案诱导治疗老年(≥60岁)AML患者临床疗效及安全性。方法：选取年龄≥60岁初发或复发难治AML,给予1-2疗程改良CAG联合后程地西他滨(CAG-D)方案诱导化疗。收集患者临床资料,评估诱导化疗缓解率及化疗过程中出现的不良反应和骨髓恢复时间,随访分析患者化疗后总生存时间。结果：12例患者入组本临床试验,其中男性7例,女性5例；初发患者9例,复发难治患者3例；中位年龄67岁(60岁～75岁)；经CAG-D方案诱导化疗后9例获完全缓解,其中8例接受一疗程化疗即达完全缓解；9例初发患者中8例获完全缓解,1例获部分缓解；3例复发难治患者中,1例获完全缓解,1例获部分缓解,1例未缓解；4例M5患者中3例获完全缓解,1例获部分缓解；总有效率和完全缓解率分别为91.6%和75%；诱导治疗获完全缓解患者白细胞恢复中位时间为24.2天(16天～43天),血小板恢复中位时间为17.9天(11～37天)；完全缓解患者的中位总生存(13月)明显优于未缓解患者(5月),差异有统计学意义(P<0.05)。化疗期间主要不良反应为Ⅳ级骨髓抑制及Ⅰ～Ⅳ度粒细胞缺乏伴发热,诱导化疗期间无患者死亡。结论：改良CAG联合后程地西他滨用于老年AML诱导化疗临床缓解率高,尤其对于初发患者疗效更佳；治疗期间骨髓抑制及感染等并发症常见,需加强抗感染、输血等支持治疗。全文总结地西他滨联合改良CAG方案可能主要通过抑制白血病细胞增殖及诱导白血病细胞凋亡发挥作用,尤以CAG前给予地西他滨处理发挥上述作用更明显；CAG后程加用地西他滨提高S期细胞靶向作用并保留部分分化诱导机制。地两他滨增强CAG方案杀伤白血病的机制可能与上调凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9及下调c-myc、Bcl-2蛋白有关：改良CAG方案联合后程地西他滨用于老年AML诱导化疗缓解率高、不良反应可耐受,值得进一步进行临床研究。