利用脂肪酶催化油脂和短链醇合成生物柴油的方法具有潜在的经济价值,但是由于大部分脂肪酶价格过高且在有机溶剂中易失活,从而难以进行工业化应用。脂肪酶的表面展示技术不需要进行蛋白的分离和纯化,因此可以降低脂肪酶的生产成本。本文以变形杆菌脂肪酶为对象,以sfGFP为锚定蛋白,选取大肠杆菌为宿主,将脂肪酶展示于大肠杆菌表面。在此基础上,本文还研究了酶学性质,并以全细胞为催化剂进行生物柴油的合成,为其大规模工业应用奠定基础。本论文主要研究工作摘要如下:(1)首次以sfGFP为锚定蛋白,将变形杆菌脂肪酶基因融合于sfGFp编码基因的C端,构建自诱导型表面展示载体pETsfGFP-LipA。pETsfGFP质粒是本实验室是用原始质粒pET-23a和sfGfp基因构建的。将重组质粒pETsfGFP-LipA转入大肠杆菌Rosetta-Blue感受态细胞中进行表达。细胞表面展示的酶活力最高可达到7309 U/g干细胞。(2)利用免疫荧光显微技术和流式细胞仪分析确定LipA成功展示于大肠杆菌Rosetta-Blue细胞表面。(3)研究展示脂肪酶的酶学特性,发现展示脂肪酶最适温度为37℃,最适PH为8.0。TirtonX-100对其有激活作用,60%甲醇处理18h后残余酶活为73%,60%乙醇处理18h后残余酶活为117%。(4)研究利用LipA催化大豆油或棕榈油和短链醇合成生物柴油的反应条件。在添加异辛烷的条件下,以大豆油为底物,甲醇或乙醇为酰基受体,醇油比对应为5:1或3.5:1,37℃反应24h后,大豆转化为脂肪酸甲酯的转化率为43%。以棕榈油为底物,甲醇或乙醇为酰基受体,醇油比对应为5:1或3.5:1,37℃反应24h后棕榈油转化为脂肪酸甲酯的转化率为57%。