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目的:本实验通过LPS作用于体外培养的SD大鼠大脑皮层Ast,探索LPS对Ast活化的最佳条件;探讨LPS对Ast的IL-1β分泌和Kir-4.1表达的影响及后两者间可能存在的关系,为预防和治疗癫痫提供新方法。方法:1)取24 h内出生的SD大鼠,打开颅骨取大脑半球皮质区,剥离脑膜和血管获取大脑皮层,用剪刀将其剪碎,用含0.25%的胰蛋白酶进行消化,用含10%的血清培养液吹打终止消化,移至离心管离心后弃上清液,用种植培养基将其制备成单细胞悬液。经过细胞计数并差速贴壁处理后,接种到25cm2培养瓶中,用DMEM/F12培养基原代培养7~10 d。待细胞铺满整个瓶底,纯化18 h后,在超净台内经过消化后进行细胞传代培养。经过3次传代可获得较高纯度的Ast细胞,采用免疫细胞化学法对其进行纯度检测。2)应用MTT法检测LPS对Ast的活化作用:将培养好的细胞分成实验组和对照组,实验组用不同浓度LPS(1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)分别处理Ast不同时间(12 h、24 h、36 h、48 h)后,采用MTT法进行细胞活性检测;对照组为同一条件下没有作任何处置的Ast细胞。3)应用ELISA法检测中LPS诱导Ast的IL-1b分泌情况。实验组用LPS(5μg/ml)处理Ast不同时间(12 h、24 h、36 h、48 h)后,采用ELISA法进行细胞分泌情况检测;对照组为同一条件下没有作任何处置的Ast细胞。4)应用RT-PCR技术,检测实验组与对照组中Kir-4.1、IL-1bmRNA的表达情况。结果:1)GFAP免疫细胞化学法鉴定结果显示,GFAP阳性星形胶质细胞较多,纯度可达到95.50%,由此说明培养的细胞可以用于后续的实验。2)LPS对Ast的活化作用:通过MTT实验结果发现,LPS可以诱导体外培养的Ast活化,并且呈浓度和时间依赖性。3)ELISA法检测结果显示:与对照组相比较,LPS(5μg/ml)处理Ast不同时间(12h、24h、36h)后,细胞培养上清中的il-1b水平显著升高。(p<0.05)4)经半定量rt-pcr检测结果显示:随着lps处理时间的延长,kir-4.1mrna的表达逐渐下降、而il-1bmrna的表达则逐渐上升。结论:1)使用原代分离培养、纯化传代的方法可获得较高纯度的ast。2)lps可诱导体外培养的ast活化,且当lps浓度为5μg/ml,处理时间为36h时ast呈现最佳激活状态。3)lps诱导活化的ast中,kir4.1mrna表达的变化可能受il-1b的调节。