论文部分内容阅读
本论文系统研究了猪胰脂酶的固定方法和酶促酯交换制备类可可脂的工艺条件优化.首先,对活性炭,大孔吸附树脂,硅胶,硅藻土,大孔玻璃珠,202红色担体等固定载体进行筛选.以筛选出的大孔吸附树脂为载体研究了猪胰脂酶吸附固定的方法及其固定条件的优化.着重阐述了加酶量,含水量,缓冲液pH,吸附时间等因素对固定效率及固定化酶比活的影响.最佳固定条件为酶加量300mg/g;吸附时间4h;吸附pH7.5;水分含量20﹪.同时还研究了固定化酶的热稳定性,操作稳定性以及米氏常数等性质.所得的固定化酶与游离酶相比,比酯交换能力提高了6.9倍;水解最适温度提高了10℃;50℃保温12h后相对活力由30.98﹪上升到83.14﹪;连续操作5批次后的相对活力则由32.20﹪上升到83.50﹪.固定化酶不论在酶活还是在稳定性方面都有较大提高.随后对以茶油,硬脂酸甲酯,棕榈酸甲酯为底物,在自行制备的固定化酶的催化作用下对酯交换反应制备类可可脂进行了系统研究.先经过正交实验对反应时间,反应温度,加酶量,体系含水,底物比,有机溶剂,酰基供体等因素对酯交换反应的影响进行显著性检验,随后对影响显著的5种因素作单因素实验以详细研究它们对酶促酯交换反应的影响情况.通过以上实验,找到了制备类可可脂的最优条件:体系含水量10mg/g;反应温度35℃;底物比为茶油:硬脂酸甲酯:棕榈酸甲酯=1:8:8(mol/mol);酶加量15wt﹪;反应时间60小时;有机溶剂,正己烷;酰基供体,硬脂酸甲酯,棕榈酸甲酯.所得产物甘三酯在sn-2位上主要为油酸(77.19﹪),甘三酯的棕榈酸含量为31.43﹪,硬脂酸含量为29.26﹪,油酸含量为35.30﹪,与天然可可脂相似,其理化性质(酸价,碘值,皂化值,固体脂肪膨胀曲线等)与天然可可脂也十分接近,为一种较为理想的富含1,3饱和-2不饱和型甘三酯(SUS)的类可可脂.在本论文对酶促酯交换产品的分离过程中也发现硅胶柱层析法是分离酯交换产物的一种有效方法.