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背景类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是一种以滑膜增生、软骨降解和骨质破坏为特征的高度致残性自身免疫性疾病。T、B淋巴细胞异常增殖,Th1/Th2比例失衡及其分泌的细胞因子是其主要发病机制。目前RA最佳治疗策略是早期联合改善病情抗风湿药物,其临床缓解率仅40-70%,且当病情发展至关节畸形时尚无方法修复软骨及骨破坏。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)是一种非造血干细胞,具有自我更新、高度增殖及多向分化的能力。研究发现BMSCs除具有支持造血,促进体内造血功能重建外,尚具有免疫调节功能,故在治疗自身免疫性疾病中有着广泛的应用前景,为RA治疗开辟了新的方向。目的通过检测大鼠脾脏中T细胞、B细胞的增殖情况及CD4+ CD25+调节性T细胞和Foxp3 mRNA,观察不同期BMSCs移植对胶原诱导关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠脾脏中免疫细胞的影响,阐述其体内免疫调节作用机制。方法1.建立CIA大鼠模型:用含牛Ⅱ型胶原1mg/ml的弗氏完全佐剂(complete Freund’s adjuvant, CFA)免疫Wistar大鼠;2. BMSCs的分离、培养、传代与鉴定:密度梯度离心法结合贴壁法分离BMSCs,用含10%胎牛血清的L-DMEM培养液培养,细胞至80%融合时按1:3传代扩增;流式细胞术检测P3代BMSCs表面抗原CD44、CD71、CD31及CD45表达,进而鉴定所培养细胞为BMSCs;3. CIA大鼠分组:将40只CIA大鼠分为5组:①BMSCs早期治疗组(佐剂初次诱导时给予BMSCs移植);②BMSCs晚期治疗组(佐剂第二次诱导时给予BMSCs移植);③CIA早期对照组(佐剂初次诱导时给予生理盐水);④CIA晚期对照组(佐剂第二次诱导时给予生理盐水);⑤正常对照组;4.异基因BMSCs移植:均采用尾静脉注射,每只大鼠移植的细胞数为1×107个/kg;对照组以同样方法给予等容量的生理盐水;给予BMSCs移植或生理盐水注射后第42d处死取脾;5.指标检测:通过CCK-8测定T、B淋巴细胞增殖情况;RT-PCR测定Foxp3 mRNA表达;流式细胞术测定CD4+ CD25+调节性T细胞,收集数据,统计分析。结果1. BMSCs移植对CIA大鼠脾脏T淋巴细胞的影响:CIA对照组T细胞增殖水平高于正常对照组(P<0.05);经BMSCs治疗后T细胞增殖水平明显降低(P<0.05);且早期治疗组低于晚期治疗组(P<0.05)。说明BMSCs抑制CIA大鼠脾脏T淋巴细胞异常增殖,早期组疗效优于晚期组。2. BMSCs移植对CIA大鼠脾脏B淋巴细胞的影响:CIA对照组B细胞增殖水平高于正常对照组(P<0.05);经BMSCs治疗后B细胞增殖水平明显降低(P<0.05);但早、晚期治疗组间差异无统计学意义(P>0.05)。说明BMSCs抑制CIA大鼠脾脏B淋巴细胞异常增殖。3. BMSCs移植对CIA大鼠脾脏Foxp3 mRNA表达的影响:CIA对照组Foxp3 mRNA表达水平低于正常对照组(P<0.05);经BMSCs治疗后Foxp3 mRNA表达水平明显高于CIA对照组(P<0.05);但早、晚期治疗组间差异无统计学意义(P>0.05)。说明BMSCs上调CIA大鼠脾脏Foxp3 mRNA表达水平。4. BMSCs移植对CIA大鼠脾脏CD4+ CD25+调节性T细胞的影响:CIA对照组CD4+ CD25+调节性T细胞比例低于正常对照组(P<0.05);经BMSCs治疗后CD4+ CD25+调节性T细胞比例明显高于CIA对照组(P<0.05),且早期治疗组高于晚期治疗组(P<0.05)。说明BMSCs上调CIA大鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞水平,且早期组疗效优于晚期组。结论异基因BMSCs移植治疗CIA大鼠作用机制可能是抑制T、B淋巴细胞异常增殖、上调Foxp3 mRNA表达和CD4+CD25+调节性T细胞水平,而且疾病早期移植治疗更有效,这就为临床上利用BMSCs免疫调节作用治疗RA提供了可靠而有力的实验基础和理论依据。