黄连汤有效成分分析及其对鸭疫里氏杆菌外膜蛋白作用的初步研究

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鸭疫里氏杆菌病是由鸭疫里氏杆菌(RA)引起的严重威胁养鸭业发展的传染病,目前没有根本预防办法,必须依靠抗生素治疗,但RA对抗生素易产生耐药性。中药复方黄连汤是本人指导教师在浙江省农业科学院工作期间研制出来的针对鸭疫里氏杆菌病的、由黄连、黄柏和甘草3味中药组成的纯中药制剂,对正在流行RA病的鸭保护率达98%以上。药物制作方法已申请国家发明专利。为了深入地了解黄连汤的作用机制,为开发防治RA病的中兽药提供理论依据,本论文对黄连汤有效部位中有效成分的含量,药物对鸭疫里氏杆菌的抑菌规律及对细菌外膜蛋白的影响做了初步研究。黄连汤经水提醇沉后,提取有效部位,采用高效液相色谱法,选择6种成分进行分析。结果表明:黄连汤有效部位分别含有盐酸小檗碱5.7 mg·g-1,表小檗碱0.29973 mg·g-1,药根碱0.10866 mg·g-1,盐酸巴马汀0. 254 mg·g-1,甘草酸0.009 mg·g-1。黄连汤有效部位主要成分的测定为进一步进行药理实验和实现药物标准化奠定了基础。用制得的有效部位为药物,以鸭疫里氏杆菌为对象,采用试管抑菌方法,研究了黄连汤有效部位的抑菌规律。首先测定RA生长的标准浓度曲线,其次在不同药物浓度下分别加入振荡培养12 h的RA 20μL、50μL、120μL、190μL、250μL,测定RA的OD值,根据标准曲线关系式,计算出药物作用后细菌的浓度,进而得出各种浓度下药物对细菌的抑菌率,并对抑菌率进行方差分析。结果表明该药的抑菌效果显著。这为下一步从适量的药物中提取到足量外膜蛋白奠定基础。外膜蛋白是附着在细菌细胞膜上的跨膜蛋白,是细菌侵袭机体导致机体发病的致病因素之一。通过加药与未加药菌进行电泳条带对比。结果显示,未加药的1型Ra Omp由12-15个蛋白多肽组成,其分子质量大小为20-110 ku。加入药的RA电泳条带部分消失抑或全部消失。初步说明药物对外膜蛋白有很大的影响,从而进一步揭示了药物的治病机理。
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