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为了解山羊早期胚胎发育基因表达的分子机制,建立不同发育阶段基因表达的模式,探讨体外培养胚胎发育阻滞形成的分子机理,进行了三个方面的研究:1.单个冷冻胚胎银染mRNA差异显示方法建立的研究用昆明种小白鼠作为实验材料,通过超数排卵处理后获得小鼠早期发育的4细胞和8细胞期胚胎。通过单个鲜胚和冷冻胚胎的RT-PCR反应产物的凝胶电泳图谱及持家基因的扩增检测,表明冻胚和鲜胚具有相同的实验结果。用银染法取代同位素法,可以显示特异表达的条带,并避免了放射性污染。用一步法和煮沸法取代乙醇糖原法回收特异条带,操作简便,程序简化,经过二次扩增、回收、差异条带的亚克隆、提取质粒及酶切鉴定等环节,证明回收方法有效。用所建立的差显方法获得了一条在小鼠8细胞期胚胎特异表达的片段,经过测序及比对分析,表明与鼠2号染色体上RP23-20A6 mRNA克隆具有100%同源性。结果表明:单个冷冻胚胎银染mRNA差异显示方法有效、实用、可靠,可用于动物早期胚胎发育基因表达的研究。2.体外培养的山羊早期胚胎发育基因表达的研究通过卵母细胞的体外成熟、体外受精和体外培养方法,获取山羊早期发育的2细胞、4细胞和8～16细胞期胚胎。通过单个冷冻胚胎银染mRNA差异显示方法,共筛选到16条在不同时期胚胎特异表达的片段,其中2细胞期5条带,4细胞期4条带,8～16细胞期7条带。经过测序及比对分析,表明有4条带与已知的功能基因或调控基因相似,5条带为未知功能基因,7条带无相似基因。其中:A21条带在2细胞期胚胎特异表达,相似于人类肽基精氨酸脱亚胺酶(PAD)基因(83%);B43条带在4细胞期胚胎特异表达,相似于牛胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)基因(88%);A86条带在8～16细胞期胚胎特异表达,相似于牛NADH脱氢酶1α亚复合体4(NDUFA4)基因(97%);B83条带在8～16细胞期胚胎特异表达,相似于犬细胞周期蛋白B3(CCNB3)基因(82%)。