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初级三体是进行基因定位、染色体物理图谱构建和染色体工程研究等的重要基础材料,但目前国内外关于大白菜三体,单体的研究较少。本研究从获得的三体材料中利用去壁低渗的方法对2号,8号,10号染色体的三体和3号,6号染色体的双三体的根尖有丝分裂中期染色体的核型分析进一步明确鉴定,在此基础上采用荧光原位杂交技术进行研究,并进行了拟南芥25S rDNA在大白菜初级三体上的基因定位。 重复序列是研究物种起源和进化最有效手段之一,而高等植物中部存在重复序列,因而研究25S rDNA在大白菜不同三体上的分布,有助于在分子水平上研究种内的微观进化。25S rDNA是芸薹属中的与核糖体RNA基因合成有关的一个中度重复序列,利用荧光原位杂交技术,可准确分析这个重复序列在大白菜不同三体上的分布情况,结果如下: 1.通过有丝分裂中期核型分析,进一步明确鉴定9408—2为2号三体,9408—3为8号三体,9408—4为10号三体,9408—5为3号,6号双三体。 2.25S rDNA在2号染色体三体植株上共有5个杂交位点,有2个杂交位点分别分布在2号染色体上近中着丝粒的异染色质区,杂交信号强度较弱,另外一条同源条染色体上没有杂交信号;3号染色体的长臂的中部,有1个杂交位点,杂交信号很弱,另外一条同源染色体上没有杂交信号检出;随体染色体的随体及次缢痕处,有2个杂交位点分别分布在两条同源染色体上,而且在随体上有很强的杂交信号。 3.在8号染色体三体植株上共有7个杂交位点,1号染色体的短臂的端部有较强的杂交信号,有1个杂交位点,另外一条同源染色体上没有杂交信号检出;2号染色体上有一条同源染色体上近着丝粒处的两侧有2个杂交位点,并且杂交信号较强,另外一条同源染色体上没有杂交信号检出;在3号染色体上有2个杂交位点分别分布在两条同源染色体的近着丝粒处,杂交信号较弱;6号染色体上有1个杂交位点,分布在长臂的近着丝点处,杂交信号强度中等,另外一条同源染色体上没有杂交信号检出;在随体染色体上有1个强的杂交信号,分布在随体处,在另外一条同源染色体上由于随体、次缢痕的丢失导致rDNA位点的丧失。 4.在随体染色体三体植株上有共6个杂交位点,2号染色体的一条同源染色体上长臂近着丝粒处有较强的杂交信号,有1个杂交位点,另外一条同源染色体上近着丝粒处两侧都有杂交位点杂交信号较强。在3号染色体上长臂的中部有1个弱的杂交位点,分布在长臂的近着丝粒处,另外一条同源染色体上没有杂交位点检出。随体染色体上有2个强的杂交信号,分别分布在两条染色体的随体处,还有一条随体染色体由于随体的丢失导致rDNA位点的丧失。 5.在3号,6号染色体双三体上共有6个杂交位点。在三条3号同源染色体的长臂上近着丝粒处分别有1个杂交位点,杂交信号较弱;在两条随体染色体上有2个杂交位点分别分布两条同源染色体的随体处,杂交信号较强,还有一个杂交位点分布在一条随体染色体的近着丝粒处。