龙牙楤木皂苷合成关键酶AeHMGR基因功能研究

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a1234578
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
龙牙楤木是五加科重要药用植物之一,其主要活性物质为龙牙楤木皂苷,具有抗肿瘤、抗氧化、抗心肌缺血及抗炎等作用。龙牙楤木皂苷的合成代谢主要依靠MVA途径,其中3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)是第一个限速酶。本研究首先将茉莉酸甲酯处理的龙牙楤木愈伤组织进行转录组测序,基于转录组数据,鉴定筛选出甲羟戊酸(MVA)途径第一个关键酶基因Ae HMGR,并通过构建植物过表达载体,将其在烟草中异源表达及在龙牙楤木中过表达,利用q RT-PCR技术检测转基因烟草关键酶基因(Nt FPS、Nt SS、Nt SE)与龙牙楤木关键酶基因(Ae FPS、Ae SS、Ae SE、Aeβ-AS)的表达情况,建立高效液相色谱法(HPLC)检测龙牙楤木五种皂苷单体,并分析过表达龙牙楤木体胚中的皂苷含量,探究Ae HMGR基因在皂苷合成代谢MVA途径通路中的功能。具体结果如下:(1)处理后与未处理对照相比共获得差异表达基因586个。KEGG分析主要富集在植物激素信号转导等代谢通路中;GO分析主要富集在次生代谢过程、次生代谢物、茉莉酸响应等;在MVA通路共筛选得到关键酶基因11个,其中Ae HMGR 2个。(2)Ae HMGR基因序列的大小为1065 bp,该基因编码的蛋白为疏水性蛋白,定位于线粒体膜上,属于HMGR超家族。Ae HMGR基因在龙牙楤木不同组织中均有表达,且在体胚和茎部位具有高表达,存在明显的组织特异性。(3)成功构建了p ROKII–Ae HMGR基因植物表达载体。利用叶盘转化法将该基因转入烟草,再生得到转基因烟草株系6个。转基因烟草Nt SS、Nt FPS、Nt SE基因表达显著低于野生型,最低约为野生型的0.24倍。(4)将Ae HMGR基因转入龙牙楤木,再生得到10个过表达愈伤组织株系和5个过表达体胚株系。过表达愈伤组织株系中Ae FPS、Ae SE、Ae SS、Aeβ-AS基因表达显著低于野生型,最低约为野生型的0.3倍。过表达体胚株系中Ae HMGR基因表达显著高于野生型,Ae FPS、Ae SS基因表达降低,Ae SE、Aeβ-AS基因表达升高。体胚株系7的Ae SE、Aeβ-AS基因表达最高,为野生型的11.51倍和9.38倍。(5)建立了HPLC分析龙牙楤木五种皂苷单体的方法,利用该方法分析了过表达龙牙楤木体胚株系皂苷单体及含量,过表达体胚株系7的总皂苷含量是野生型体胚的1.14倍,为栽培叶片的0.30倍,株系7的齐墩果酸单体含量是栽培叶片的1.35倍。
其他文献
西流湖公园生态中心位于郑州市,根据建筑要求,在建筑物东南位置设置大悬挑,悬挑最大位置长度达18.40m。根据方案对比,选择钢桁架作为结构实施方案。针对大悬挑结构本身的受力特点,对其各种设计难点进行攻关,对重要结构构件进行性能设计,对关键节点进行有限元分析。本工程大悬挑结构自振周期长,因此进行了舒适度分析。针对大悬挑结构自由度高,安全冗余度低的特点,对其进行了防连续倒塌分析。根据分析结果,本工程大悬
近年来随着标准化施工水平及施工管理人员质量意识的提高,水利水电工程的施工质量也不断提高。本文通过从阐述钢拱架加工及安装技术两方面对钢拱架施工技术及质量控制要点总结,解决现场钢拱架施工的质量问题及常见问题,用于指导引水隧洞钢拱架支护作业。
化工园区内易燃易爆危险品数量大,火灾风险高,且国内没有专门针对化工园区的消防安全规划及消防力量部署规范,现行的规划依据明显偏低。本文在实地及文献调研的基础上,提出了基于重大危险源辨识的化工园区消防站规划方法。此方法共分为三个阶段,第一阶段:参考国家相关标准规范对化工园区内重大危险源进行辨识并分级;第二阶段:根据不同等级危险源的消防响应时间、消防站规划相关规定及化工园区消防站规划的特殊原则对园区消防
阅读能力是小学生需要的重点提升的能力之一。鼓励学生养成良好的阅读习惯,学习正确的阅读方法是非常重要的。与此同时,新一轮基础教育课程改革以及小学语文核心素养都特别关注学生阅读能力的提高问题。如今,不少学生在阅读方面已经暴露出了能力较弱的问题。所以,作为一名教育工作者,有必要关注提升学生阅读能力的方法与技能,帮助学生在获得语文知识的同时能进一步提升能力。
采购成本的高低直接影响企业的盈利能力,在竞争日益激烈的环境下,实现供应链上各企业的高效交流、信息共享和合作共赢成为企业追求的目标。基于供应链协同的采购策略,要求供应链上各企业有效利用相关技术与方法,推动供应商与制造商绩效水平的双重提升,实现降本增效、合作共赢和整体优化。文章以企业A为例,从公司采购环节存在的问题出发,提出基于供应链协同的采购优化策略。
文章以船舶工业企业为例,分析了其物资采购体系在当前的发展中面临机遇及挑战,以及存在的物资采购系统架构有待完善、未实现供应商分类分级管理、订单信息执行跟踪水平不高、有待加强金融业务的整合能力、需进一步强化物流领域的渗透、供应链成本控制能力相对偏弱等一系列问题,并分别从打造架构完善的供应链体系、构建分类分级的供应商管理体系、建立信息交互跟踪服务体系、建立供应链金融服务体系、持续强化物流服务能力、持续增
目前雷害已成为影响输电线路安全运行的重要因素。在输电线路运行中,保证杆塔接地电阻一直处于合格状态是减少雷击跳闸的有效手段,因此开展了免拆接地引下线的杆塔接地电阻检测技术研究,提出了一种免断开接地引下线的杆塔接地电阻测量方法,无需断开接地引下线就可快速、准确地检测杆塔接地电阻,及时发现接地系统的缺陷,保证接地系统正常工作。
<正>珍珠龙胆石斑鱼是棕点石斑鱼与鞍带石斑鱼杂交的新品种,具有生长速度快、抗逆性强、养殖成活率高、饵料系数低等优良特性,成品鱼肉质鲜美,市场前景广阔,近几年成为广西地区石斑鱼养殖的当家品种。珍珠龙胆石斑鱼在广西的育苗及养殖上都取得了突破,也形成了比较完善的产业链。但是从2厘米的白苗培育至10厘米左右的中苗,要经过中间培育过程,而中间培育在工厂化车间进行,需要倒池、换水、流水培养,
期刊
110报警服务台的创立,提高了公安机关打击犯罪、保护人民群众生命财产安全的效率但也让原则上不应该由公安机关所承受的非警务警情和不必要的工作都涌向了公安机关,极大地浪费了警力资源。随着问题的凸显,以宁波为代表的东部沿海发达地区开始探索社会应急联动指挥模式。社会应急联动指挥体系以公安110指挥中心为基础组建,整合综合行政执法、交警、消防、卫生、应急管理、供电、司法、环保、民宗、发改、科技、人武、农业农