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背景
作为肿瘤生物治疗的前沿领域，近年来，溶瘤病毒疗法显示出了巨大的应用潜力，并为肿瘤的免疫治疗提供了新的方向。溶瘤病毒疗法可通过直接于瘤内注射溶瘤病毒来触发局部和全身的免疫反应，以达到溶解肿瘤细胞，然后释放肿瘤相关抗原，随后激活肿瘤特异性效应T细胞的目的。多种溶瘤病毒在临床前和临床试验中显示出了良好的安全性、靶向性以及令人兴奋的治疗效果。一种基于Ⅰ型单纯疱疹病毒的溶瘤病毒talimogenelaherparepvec(T-VEC)已经完成了Ⅲ期临床试验，并己获得美国食品和药物管理局(FDA)的批准上市，用于治疗初次手术后复发的不可切除的黑色素瘤。了解溶瘤病毒治疗肿瘤所引起的机体免疫系统的改变及其对肿瘤微环境的影响，有利于为今后更好地应用溶瘤病毒进行免疫治疗提供有利依据。因此，本研究中我们应用一种基于Ⅱ型单纯疱疹病毒的溶瘤病毒oHSV2，探讨其在免疫完全和免疫缺陷荷瘤小鼠(小鼠结直肠癌CT26细胞系)模型中的直接溶瘤作用及其引起的抗肿瘤免疫应答。
目的
本研究的主要目的是明确oHSV2在荷瘤小鼠(小鼠结直肠癌CT26细胞系)模型中的直接溶瘤作用及其引起的抗肿瘤免疫应答。通过建立免疫完全和免疫缺陷小鼠双侧荷瘤模型，检测脾脏中淋巴细胞的表型和对肿瘤细胞的杀伤作用，以及分析双侧肿瘤微环境中的病理学特征和免疫基因的表达情况，为溶瘤病毒oHSV2激发机体特异性抗肿瘤免疫应答，改变肿瘤微环境的免疫状态提供依据。
方法
(1)应用CCK-8增殖实验检测oHSV2对小鼠结肠癌CT26细胞系的体外溶瘤活性。(2)通过皮下接种方式建立BALB/c小鼠单侧和双侧荷瘤(小鼠结直肠癌CT26细胞系)模型，探讨oHSV2的体内治疗作用及其引起的抗肿瘤免疫应答。(3)采用二次打击和免疫学杀伤实验，探讨oHSV2引起的特异性免疫应答。(4)通过皮下接种方式建立免疫缺陷小鼠双侧荷瘤(小鼠结直肠癌CT26细胞系)模型，探讨先天性免疫应答在oHSV2治疗肿瘤过程中发挥的作用。(5)应用流式细胞术检测各治疗组小鼠脾脏淋巴细胞的表型状态，同时分析双侧肿瘤病理学特征及免疫相关基因表达谱特征，探讨oHSV2治疗后机体整体免疫状态和局部肿瘤微环境的变化情况。
结果
(1)溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒oHSV2对小鼠结肠癌CT26细胞系具有显著的溶瘤作用，其效果呈时间和剂量依赖性。(2)在单侧和双侧小鼠结肠癌荷瘤模型上观察oHSV2的体内抗肿瘤作用。oHSV2治疗能有效抑制单侧和双侧肿瘤生长，延长小鼠存活时间，并且无明显副作用。(3)oHSV2治疗能够有效阻止相同肿瘤再次接种后成瘤。对于双侧荷瘤模型，单个病灶内的oHSV2治疗可同时有效抑制双侧肿瘤的生长。(4)NK细胞引起的非特异性免疫反应，即对靶细胞(被病毒感染的肿瘤细胞)的非特异性识别杀伤作用，在oHSV2治疗肿瘤的过程中同样起到了一定的抑制肿瘤生长的作用。(5)oHSV2的应用能够有效降低外周免疫中免疫抑制性细胞(如Tregs和MDSCs)的水平，有利于打破免疫耐受;同时提高了外周免疫中正向免疫细胞(如NK细胞、DCs、CD8+T细胞的)的水平，有利于加强非特异性和特异性抗肿瘤免疫反应;紧随特异性免疫应答后机体形成了免疫记忆，有利于有效防止肿瘤的转移和复发。(6)oHSV2治疗改变了肿瘤微环境的免疫状态。这种作用并非只局限于接受治疗的局部组织，而是同时会对其他部位的同种肿瘤微环境引起相似的改变。
结论
溶瘤病毒oHSV2发挥的第一重抗肿瘤作用即相对直接的使肿瘤细胞发生裂解而死亡，在第一重作用的基础上，肿瘤相关抗原(TAAs)伴随着肿瘤细胞的裂解而被释放，从而展现oHSV2治疗带来的第二重作用，即引起机体先天性免疫应答和特异性免疫应答。紧随特异性免疫应答后机体形成了免疫记忆，可有效防止肿瘤的转移和复发。溶瘤病毒oHSV2的应用可以重构小鼠脾脏和肿瘤微环境的免疫状态(包括未经病毒直接治疗的肿瘤)，提示oHSV2的局部治疗模式可以转变为一种全身性的治疗模式。因此，溶瘤病毒oHSV2具有很好的临床应用潜力。
作为肿瘤生物治疗的前沿领域，近年来，溶瘤病毒疗法显示出了巨大的应用潜力，并为肿瘤的免疫治疗提供了新的方向。溶瘤病毒疗法可通过直接于瘤内注射溶瘤病毒来触发局部和全身的免疫反应，以达到溶解肿瘤细胞，然后释放肿瘤相关抗原，随后激活肿瘤特异性效应T细胞的目的。多种溶瘤病毒在临床前和临床试验中显示出了良好的安全性、靶向性以及令人兴奋的治疗效果。一种基于Ⅰ型单纯疱疹病毒的溶瘤病毒talimogenelaherparepvec(T-VEC)已经完成了Ⅲ期临床试验，并己获得美国食品和药物管理局(FDA)的批准上市，用于治疗初次手术后复发的不可切除的黑色素瘤。了解溶瘤病毒治疗肿瘤所引起的机体免疫系统的改变及其对肿瘤微环境的影响，有利于为今后更好地应用溶瘤病毒进行免疫治疗提供有利依据。因此，本研究中我们应用一种基于Ⅱ型单纯疱疹病毒的溶瘤病毒oHSV2，探讨其在免疫完全和免疫缺陷荷瘤小鼠(小鼠结直肠癌CT26细胞系)模型中的直接溶瘤作用及其引起的抗肿瘤免疫应答。
目的
本研究的主要目的是明确oHSV2在荷瘤小鼠(小鼠结直肠癌CT26细胞系)模型中的直接溶瘤作用及其引起的抗肿瘤免疫应答。通过建立免疫完全和免疫缺陷小鼠双侧荷瘤模型，检测脾脏中淋巴细胞的表型和对肿瘤细胞的杀伤作用，以及分析双侧肿瘤微环境中的病理学特征和免疫基因的表达情况，为溶瘤病毒oHSV2激发机体特异性抗肿瘤免疫应答，改变肿瘤微环境的免疫状态提供依据。
方法
(1)应用CCK-8增殖实验检测oHSV2对小鼠结肠癌CT26细胞系的体外溶瘤活性。(2)通过皮下接种方式建立BALB/c小鼠单侧和双侧荷瘤(小鼠结直肠癌CT26细胞系)模型，探讨oHSV2的体内治疗作用及其引起的抗肿瘤免疫应答。(3)采用二次打击和免疫学杀伤实验，探讨oHSV2引起的特异性免疫应答。(4)通过皮下接种方式建立免疫缺陷小鼠双侧荷瘤(小鼠结直肠癌CT26细胞系)模型，探讨先天性免疫应答在oHSV2治疗肿瘤过程中发挥的作用。(5)应用流式细胞术检测各治疗组小鼠脾脏淋巴细胞的表型状态，同时分析双侧肿瘤病理学特征及免疫相关基因表达谱特征，探讨oHSV2治疗后机体整体免疫状态和局部肿瘤微环境的变化情况。
结果
(1)溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒oHSV2对小鼠结肠癌CT26细胞系具有显著的溶瘤作用，其效果呈时间和剂量依赖性。(2)在单侧和双侧小鼠结肠癌荷瘤模型上观察oHSV2的体内抗肿瘤作用。oHSV2治疗能有效抑制单侧和双侧肿瘤生长，延长小鼠存活时间，并且无明显副作用。(3)oHSV2治疗能够有效阻止相同肿瘤再次接种后成瘤。对于双侧荷瘤模型，单个病灶内的oHSV2治疗可同时有效抑制双侧肿瘤的生长。(4)NK细胞引起的非特异性免疫反应，即对靶细胞(被病毒感染的肿瘤细胞)的非特异性识别杀伤作用，在oHSV2治疗肿瘤的过程中同样起到了一定的抑制肿瘤生长的作用。(5)oHSV2的应用能够有效降低外周免疫中免疫抑制性细胞(如Tregs和MDSCs)的水平，有利于打破免疫耐受;同时提高了外周免疫中正向免疫细胞(如NK细胞、DCs、CD8+T细胞的)的水平，有利于加强非特异性和特异性抗肿瘤免疫反应;紧随特异性免疫应答后机体形成了免疫记忆，有利于有效防止肿瘤的转移和复发。(6)oHSV2治疗改变了肿瘤微环境的免疫状态。这种作用并非只局限于接受治疗的局部组织，而是同时会对其他部位的同种肿瘤微环境引起相似的改变。
结论
溶瘤病毒oHSV2发挥的第一重抗肿瘤作用即相对直接的使肿瘤细胞发生裂解而死亡，在第一重作用的基础上，肿瘤相关抗原(TAAs)伴随着肿瘤细胞的裂解而被释放，从而展现oHSV2治疗带来的第二重作用，即引起机体先天性免疫应答和特异性免疫应答。紧随特异性免疫应答后机体形成了免疫记忆，可有效防止肿瘤的转移和复发。溶瘤病毒oHSV2的应用可以重构小鼠脾脏和肿瘤微环境的免疫状态(包括未经病毒直接治疗的肿瘤)，提示oHSV2的局部治疗模式可以转变为一种全身性的治疗模式。因此，溶瘤病毒oHSV2具有很好的临床应用潜力。